目的：构建含有Furin 识别序列和核定位信号的抗HER2 单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因，在大肠杆菌中表达、纯化后，对纯化产物的结合活性和内化活性进行研究。 方法：设计引物扩增抗HER2 单链抗体e23sFv 基因，与轻链恒定区编码序列（Ck）连接成ScFv/Ck 片段；人工合成含Furin 识别序列（FCS）、鱼精蛋白截短体（tP）和核定位信号（NLS）的基因序列，为避免可能存在的空间位阻，各序列之间以G4S 连接肽隔开，将合成的序列连接于ScFv/Ck 末端，构建成ScFv/Ck/FCS/G4S/tP/G4S/NLS 融合基因，在此基础上还构建了ScFv/Ck/FCS/G4S/tP、ScFv/Ck/tP/G4S/NLS、ScFv/Ck/tP、ScFv/Ck 融合基因，将其克隆入原核表达载体pET28a 和pET32a，在大肠杆菌BL21(DE3)LysS 中诱导表达，表达产物经SDS-PAGE 和Western Blot 鉴定后，用Ni-NTA 螯合层析介质纯化。细胞ELISA 分析融合蛋白的抗原结合活性，凝胶迁移阻滞实验检测融合蛋白与DNA 的结合活性，间接免疫荧光检测融合蛋白的内化活性。 结果：经酶切鉴定及测序证实：扩增的目的基因序列正确，成功构建了含有Furin 识别序列和核定位信号的抗HER2 单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白原核表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS 用IPTG 原核诱导表达，SDS-PAGE 证实五种融合蛋白成功表达，并且利用Ni-NTA 螯合层析介质使之得到有效纯化。细胞ELISA 检测证实五种融合蛋白均具有HER2结合活性，凝胶迁移实验结果提示含tP 的融合蛋白具有DNA 结合活性。间接免疫荧光检测提示五种融合蛋白均可内化入HER2 表达阳性的细胞，而不能内化入HER2 表达阴性的细胞。同时含有Furin 识别序列和核定位信号的融合蛋白ScFv/Ck/FCS/G4S/tP/G4S/NLS 的内化活性优于其他四种融合蛋白。 结论：ScFv 与Ck、Furin 识别序列、tP、NLS 融合后，同时具有抗原和DNA 结合活性，并且能够特异地内化入HER2 表达阳性的细胞，Furin 识别序列和NLS 的融合能够增强这种内化作用，为该ScFv 用于靶向输送DNA 或siRNA 的研究奠定了基础。