论文部分内容阅读
茶[Camellia sinensis (L.) O.Kuntze]为山茶科山茶属植物,是一种起源于我国的重要经济作物。为了应用现代生物技术创新茶树种质资源以及提高茶树微繁水平,需要建立一个稳定且高频发生的茶树再生体系,而通过诱导体细胞胚发生则是目前最为有效的途径。本文针对茶体胚诱导率和分化率低的问题,在分析总结前人研究的基础,进一步对外植体材料和培养条件进行优化与集成,以提高茶体胚的发生和分化率,为建立高频稳定的再生体系进行有益的探索;同时采用透射电子显微镜跟踪观察茶体胚发生过程中的细胞超微结构变化,分析其内含激素、可溶性蛋白和可溶性糖含量,有利于探明茶体细胞胚发生及分化过程中的生理生化变化,为再生体系建立提供科学的理论依据。其研究结果如下:1.成熟度依次递增的茶籽E1、E2、E3和E4四种外植体中,以E2诱导分化体胚的频率最高,E3次之,而E1在灭菌时耗损率较高,E4发生率最低。因此,E2茶籽外植体是诱导茶体胚发生的优良材料。2.有利于茶体胚诱导及分化的培养条件为:预培养MT+1 mg/L BA + 0.2 mg/L IBA +0.05 mg/L2,4-D,光照强度为500 lx,光照时间12 h/d;诱导培养MT+4 mg/L BA +2 mg/L IBA +1 mg/L NAA,黑暗处理;分化培养MT+BA4mg/L+IBA2 mg/L,1500 lx,12 h/d;按上述条件进行组合培养,获得的再生植株率最高。3.在茶体胚发生和分化过程中,细胞形态以及超微结构都发生显著的变化,其中细胞有拉长,由椭圆变成长椭圆形,核发生两次位置的变化,内质网、质体、线粒体等细胞器均在数量形态上发生相应的变化。此外,内含成分变化也呈现一定的规律,内源激素IAA、ZR、ABA含量在体胚出现前(YM)达到峰值,GA3在则体胚出现前(YM)含量最低;可溶性蛋白的含量一直呈增加趋势;可溶性糖的含量则是在体胚发生的前期下降后在形成的体胚中再次上升。