CRISPR/Cas为代表的基因编辑技术能够准确高效地对基因组进行特异DNA修饰,具有非常广阔的应用前景。利用基因编辑技术对遗传致病基因进行定点修复是基因治疗的重要研究方向。然而高效导入外源基因是基因治疗的难点和关键,如何将CRISPR/Cas9系统及修复模板有效导入成体组织器官中产生基因编辑效果是成功的关键因素之一。目前在成年小鼠中进行基因编辑的研究还非常有限,本论文旨在通过优化各类病毒包装和纯化技术体系,得到高滴度的重组病毒,探索不同重组病毒体系将CRISPR/Cas9系统导入成年小鼠肝脏中的基因编辑效率,为将来的基因治疗应用打下技术基础。本论文首先通过优化慢病毒包装体系,获得滴度为7.9×1010IU/mL的CRISPR/Cas慢病毒,并成功在小鼠体内进行基因编辑,切割率为5.21%;由于慢病毒切割率较低,且具有整合风险,我们进而优化了腺病毒扩增纯化系统,获得滴度为7.5×1012PFU/mL的腺病毒。纯化的腺病毒成功在小鼠体内感染肝脏细胞,感染率接近100%,实现18.9%的基因组编辑,包括10%左右的突变和8.9%的重组修复效率;由于重组腺相关病毒(AAV)毒性较低可用于临床研究,我们同时优化了 AAV包装系统,产生了滴度为2×1013 vg/mL的AAV,纯化的AAV在活体肝脏细胞和心肌细胞的感染率都可以达到80%。本课题成功构建了三种高滴度病毒平台,为CRISPR/Cas9系统的高效递送提供了运载工具,可用于研究CRISPR/Cas9介导的遗传疾病治疗。