二维液相色谱因其较好的分离能力而在天然产物的分析分离中被广泛应用,其中NPLC×RPLC的正交性最好,却一直存在溶剂不兼容的问题,为体系开发带来诸多困难。然而本课题在研究不同有机溶剂时意外发现,正己烷对反相色谱行为的影响较小,用其溶解样品在反相色谱分析时甚至可以获得优于甲醇等溶剂的分离效果,因此传统认知中关于有机溶剂的溶剂效应问题有待确证。为进一步证明该发现的正确性,本课题以不同极性的模式化合物为研究对象考察了不同溶剂体系对反相色谱的分离性能的影响,并在此基础上进行了正己烷溶剂体系在反相色谱中的适应性研究,最终确证反相色谱可耐受一定量的正己烷,从而得到优于甲醇等溶解样品的分离效果。基于此理论,本课题尝试构建新型正反相二维联用色谱体系,虽然在分析型二维色谱系统方面没有取得显著成效,但构建了新型NPLC×RPLC二维离线制备体系,以蟾酥为模式药材验证了体系的可行性,并将此新型体系应用于深海宏基因克隆子4-1菌株的成分分离,从菌株发酵液提取物中共分离出20个单体化合物。本文首次提出以正己烷为溶剂体系溶解样品在反相色谱中不会产生较强溶剂效应的理论,为后续的正反相联用色谱体系的开发提供了一定的理论基础,开发的新型NPLC×RPLC联用制备色谱可用于天然产物的分离分析。