Thermobifida fusca和Saccharomonospora viridis麦芽糖α-淀粉酶的定点突变

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pengpeng88888
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
麦芽糖α-淀粉酶是指一类能够单独水解淀粉获得麦芽糖含量在50%以上糖浆的α-淀粉酶,如与脱支酶配合使用水解淀粉能获得麦芽糖含量达70%以上,因而高产麦芽糖α-淀粉酶在工业生产麦芽糖浆中有重要的应用前景。  本研究采用定点突变的方法分别对来自Thermobifida fusca和Saccharomonospora viridis的麦芽糖α-淀粉酶(Tfa和Sva)进行分子改造,使其酶学性质改善特别是增加水解淀粉的麦芽糖产量以适应工业生产上对高产麦芽糖α-淀粉酶的需求。通过同源建模,选定Tfa的D-219、K-222、H-223、和Y-247这四个关键活性位点定点突变,其中Lys-222与His-223位于底物结合裂缝催化亚位点+2;选定Sva的His-220进行突变研究,其位于底物结合裂缝催化亚位点+2。  Tfa的7个突变子中,除D219A没有活性以外,其余突变子均有活力。野生酶Tfa的最适温度为60℃,而六个突变子的最适温度有着5至15℃不同程度的下降。而在最适pH方面,Tfa和K222R的最适pH为7.5;其余突变子的最适pH有着5至10个单位的下降。H223Q的比活力是唯一比Tfa高的突变子,升高了3.8%,其余突变子均下降超过40%以上,同时所有突变子的Vmax值皆比Tfa要降低。在Km值方面,H223L和H223D比Tfa的Km值降低了20%以上;K222R几乎没变,Y247A、H223Q、K222T和Y247A均升高34%以上。在产物生成方面,所有酶的麦芽三糖的含量皆提高,所有突变子的麦芽糖含量都低于Tfa。  Sva的突变子H220Q的最适pH与Sva一致都是7.0,但H220Q的最适温度45℃比Sva降低了10℃。H222Q的Km值比Sva升高了16%,比活力增长了17%,Vmax相差不大。Sva的水解淀粉麦芽糖产量高达76%,而H223Q的麦芽糖含量比Sva低12%,麦芽三糖则是Sva的1.8倍。反应相同时长的麦芽糊精有比淀粉水解更彻底的趋势。用750U的糖化酶、Sva和H220Q分别与900g淀粉反应48h后,糖化酶生成了8.031g葡萄糖,Sva得到了0.239g的葡萄糖、3.951g的麦芽糖和2.994g的麦芽三糖,H220Q产生了0.150g的葡萄糖、2.647g的麦芽糖和2.540g的麦芽三糖。
其他文献
艺名抱海。现为中国美术家协会会员。其作品多次参加全国展览并获奖,许多画作被人民大会堂、中南海、中央军委办公厅及各大博物馆、纪念馆等多家单位收藏。现居北京。 Arts
殷叶子,中国新生代女演员,舞蹈专业出身,平时喜欢拍照,在相机面前总是自信满满。2007年,殷叶子在轰动一时的《红楼梦中人》选秀活动中获得黛玉组全国八强和最佳上镜奖,并邂逅
目的:在中枢神经系统疾病中,常伴有脑组织缺血、缺氧以及缺血再灌注损伤,这些改变是病人致死、致残的主要原因。近年来相关研究表明,缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)可提
本文以贵州分离的山羊痘病毒为实验材料,研究山羊痘病毒在体外感染敏感细胞的致细胞凋亡的调节作用,进一步研究了与细胞凋亡相关的重要因子—山羊痘病毒抗凋亡毒力因子(Goatpox
近几年来,高速增长的经济使得酒店业蓬勃发展,但高端的星级酒店因为价格较高而让顾客望而止步,而许多“招待所”等低端酒店却由于环境和卫生状况较差将不受客人的青睐。经济
作品名称:菊花图作者:陈洪绶朝代:明作品规格:纵23.6厘米横22.6厘米材质:绢木 庋藏地:美国克利夫兰艺术博物馆陈洪绶(1599-1652),明代清初书画家、诗人。字章侯,幼名莲子,一
摘要:随着社会的发展,人们对身体素质的要求越来越高,体育课在高中课程中越来越重要,加强体育训练,不仅有利于学生的身体发 展,也是对整个高中课程学习的一个调节。体育课能够让学生从繁忙的学习中走出课堂进行身体锻煉,不仅仅能够强健骨骼,还能缓解学生学习压力,促进他们的身心健康发展。  关键词:初中体育;观念;评价一、转变学生思想观念,  虽然体育课是学校体育中最重要的一块内容,但显然学生并未真正的重视它
西瓜食酸菌(Acidovorax citrulli)侵染葫芦科植物会使其产生一种破坏力极大的瓜类细菌性果斑病(bacterial fruit blotch,BFB),该病害已在世界各国迅速传播,对当地的西甜瓜产
摘要:合作学习是课堂教学中充分发挥学生主体作用的一种有效方法,也是当前引导学生学习的有效途径。合作学习是以团队学习为基本形式,并非简单意义的把成员结合在一起的共同学习。合作学习是学生以小组为基本单位的教学形式,以培養学生的合作意识、创新精神和实践能力为目的的学习方式。  关键词:初中语文;合作教学;语文教学在同一堂课上,天赋高的学生往往比天赋低的学生获得更多的表现机会。本人认为,在课堂上实施合作学
玉米(Zea mays L.)是世界上主要的粮食和饲料作物,也是植物分子遗传研究的重要模式。玉米种子既是玉米最为重要的生产性状,同时也是研究种子发育的重要模式器官,具有重要的研究价