论文部分内容阅读
α-Synuclein是帕金森氏症患者大脑神经元中淀粉样蛋白沉积路易小体的主要成分。α-Synuclein由140个氨基酸残基组成，分子内不含任何信号肽序列，但我们发现它在大肠杆菌中重组表达时主要存在周质腔中。在排除细胞分级手段或过量表达造成实验假象的可能性后，系统检查了实现转运的机制。实验表明α-Synuclein不是通过SecA依赖的或Tat蛋白转运通路实现转运，也不是通过在渗透压变化条件下开启的MscL释放到周质腔。α-Synuclein的转运表现为与信号肽识别颗粒依赖的蛋白转运通路相关。进一步检查了α-Synuclein实现转运的结构基础，C端的99-140序列具有类似信号肽的作用，可能与分子中部61-95片段协同作用而实现转运到周质腔，N端60个氨基酸残基对转运没有贡献。
内质网中催化蛋白质氧化折叠酶的结构与功能
二硫键对蛋白的结构稳定与功能行使都有重要意义。蛋白质以还原形式进入内质网，迅速被蛋白质二硫键异构酶氧化形成二硫键。还原的蛋白质二硫键异构酶则被Erol氧化重新获得催化蛋白氧化折叠的能力。哺乳动物中具有两种Erol的形式：ErolLα和ErolLβ。
作者发现ErolLα能够识别并氧化含有-CXXC-活性位点的硫氧还蛋白折叠结构域，如硫氧还蛋白以及蛋白质二硫键异构酶单独的a和a’结构域。这一氧化还原反应与活性位点的氧化还原电势密切相关。突变硫氧还蛋白折叠结构域中保守的顺式脯氨酸残基引起ErolLα对蛋白质二硫键异构酶单独的a’结构域氧化效率的降低。但用pulldown方法没有检测到ErolLα与硫氧还蛋白或蛋白质二硫键异构酶单独的a和a’结构域之间稳定的相互作用，暗示EroILα与后者的瞬间相互作用导致氧化完成。
ERp57是蛋白质二硫键异构酶家族中的重要成员，通过同两种凝集素类分子伴侣相互作用特异性地帮助糖蛋白的氧化折叠。我们重组表达获得的ERp57蛋白以单体形式存在，其巯基氧化还原酶活力和异构酶活力约为蛋白质二硫键异构酶活力的68％和39％。ErolLα在体外能够氧化ERp57，但氧化效率显著低于其对蛋白质二硫键异构酶的氧化。已获得10A分辨率的ERp57晶体，正在进行优化。