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目的:1.探讨C反应蛋白(CRP)对3T3-L1脂肪细胞中脂肪因子脂联素(adiponectin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、瘦素(leptin)、chemerin、转录因子PPAR-γ2表达的影响,并初步探讨其影响各脂肪因子表达的分子机制。
方法:1.体外培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化成熟后,分别以不同浓度梯度(0、5μg／ml、25μg／ml、50μg／ml)的CRP干预24小时,实时荧光定量PCR法检测adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、转录因子PPAR-γ2基因的表达情况。2.3T3-L1脂肪细胞诱导成熟后,用50μg／ml CRP分别干预0h、2h、4h、6h、12h、24h后,用实时荧光定量PCR法检测adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、转录因子PPAR-γ2基因的表达情况。3.3T3-L1脂肪细胞诱导成熟后,分别用磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)信号通路抑制剂Wortmannin10μM、CRP50μg／ml、CRP50μg／ml+Wortmannin10μM干预细胞24小时,采用实时荧光定量PCR法检测adiponectin、TNF-α、IL-6、leptin、chemerin、转录因子PPAR-γ2基因的表达情况。
结果:(1)实时荧光定量PCR法结果显示:25μg／ml CRP作用24小时即显著抑制adiponectin、leptin、PPAR－γ2基因的表达(其表达分别下降了约33％、52％、28％(p<0.01)),促进了TNF-α、IL-6、chemerin基因的表达(分别上升了约39％、29％、149％(p<0.01))；50μg／ml CRP则使adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表达分别下降了约45％、62％、54％(p<0.01),TNF-α、IL-6、chemerin基因的表达分别上升了约83％、161％、222％(p<0.01),表现出了剂量依赖的趋势。(2)50μg／ml CRP干预12h即显著抑制adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表达(其表达分别下降了约38％、49％、33％(p<0.01)),促进了TNF-α、IL-6、chemerin基因的表达(分别上升了约41％、42％、113％(p<0.01))；而干预24h则使adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表达分别下降了约45％、62％、54％(p<0.01),TNF-α、IL-6、chemerin基因的表达分别上升了约83％、161％、222％(p<0.01),表现出了时间依赖的趋势。(3)在诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,Wortmannin10μM部分逆转了CRP50μg／ml对adiponectin、TNF-α、leptin基因的影响,分别使adiponectin、TNF-α、leptin的表达恢复到对照组的76％、118％、63％(p<0.01),其余基因的表达则无明显改变(p>0.05)。
结论:CRP以剂量和时间依赖的方式抑制了3T3-L1脂肪细胞adiponectin、leptin、PPAR-γ2基因的表达,促进了TNF-α、IL-6、chemerin基因的表达；PI-3K途径可能是CRP调控脂肪因子adiponectin、TNF-α、leptin的机制之一；CRP可能通过影响这些与胰岛素抵抗、肥胖等疾病相关的脂肪因子的表达,导致胰岛素抵抗和肥胖等相关疾病的发生。