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对米曲霉FS-1产脂肪酶进行发酵优化。首先通过单因素实验,确定发酵最适碳源为玉米粉,氮源为蛋白胨。然后通过Plackett-Burman试验设计对培养基中的8个成分进行筛选,得到对影响产酶结果最显著的3个培养基成分是蛋白胨、橄榄油和Na2HPO4。通过Box-Behnken中心组合设计对以上3个显著成分进行优化,获得三成分的最佳组合。优化后的最适培养基配方为(g/L)：玉米粉0.5,蛋白胨50,橄榄油15, NaNO3 10, Na2HPO4 2.5, KC1 0.5, MgSO4 0.5, FeSO4 0.01。发酵条件优化获得最适条件：接种量2%,装液量20m1/250mL三角瓶,发酵温度为28℃,发酵初始pH为8.0,发酵时间为48h。产酶水平从初始的3.25U/mL提高到18.75U/mLFS-1脂肪酶的分离纯化。收集发酵液上清,上清分别经过60%硫酸铵沉淀、透析除盐、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析等纯化步骤,纯化后的酶的比活力为287.81U/mg、纯化倍数为9.21、回收率为26.39%,SDS-PAGE电泳测定蛋白质纯度,电泳图谱为单一条带,表明纯化得到较纯蛋白样品。FS-1脂肪酶理化性质的测定。该酶分子量为40.64 kDa。最适酶促反应温度为36℃C,40℃以内酶的热稳定性好。最适酶促反应pH值为7.0,在pH值为3.0-9.0的范围内相对稳定。以橄榄油、三丁酸甘油酯为底物分别进行酶的动力学研究,结果表明,两者的酶促反应都符合米氏方程,最大反应初速度Vm分别为23.70 umol/mL/min,24.33μmol/mL/min,米氏常数Km分别为48.44μmol/mL、20.43μmol/mL,反应活化能(Ea)分别为41.78 kJ/mol、31.68 kJ/mol。不同效应物对FS-1脂肪酶活力的影响。(1)金属离子对酶活力的影响：一价金属离子Na+、K+、Li+以及二价金属离子Ba2+对酶促反应无影响。Ca2+对酶活力有促进作用；二价金属离子Mg2+、Cu2+、Fe2+、Hg2+以及三价金属离子Fe3+、A13+对酶活都有不同程度的抑制作用。(2)有机溶剂对酶活力的影响：甲醇、乙醇、甲醛、异丙醇对酶均有不同程度的抑制作用；甲醛对酶抑制作用最强烈；正戊烷对酶活力没影响。(3)不同化学修饰剂对酶活力的影响：顺丁烯二酸酐、溴乙酸、N-乙酰咪唑、β-巯基乙醇、乙酰丙酮、氯胺-T、N-溴代丁二酰亚胺、苯甲基磺酸钠(PMSF)这8种修饰剂中,只有β-巯基乙醇和苯甲基磺酸钠对酶产生影响,初步判断甲硫氨酸、丝氨酸残基与酶的催化活性密切相关。