目的 成骨细胞(osteoblast)在骨质疏松的研究中占有重要地位,是骨形成的主要细胞,也对骨吸收发挥调节作用.方法 1大黄素对体外培养成骨细胞的影响:应用酶序列消化分离培养法培养新生大鼠颅骨成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、碱性磷酸酶染色法、茜素红染色法、放射免疫测定法、流式细胞术、紫外分光光度法、原子吸收光谱法及RT-PCR等方法鉴定成骨细胞和观察大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶含量、骨钙素含量、钙和羟脯氨酸含量、骨结节数目和面积、I型胶原和骨保护蛋白mRNA表达的影响.2大黄素对骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的影响:应用密度梯度离心的方法和传代贴壁筛选相结合的方法分离纯化骨髓基质细胞.应用对硝基苯磷酸盐法、碱性磷酸酶染色法、放射免疫测定法判断骨髓基质细胞是否向成骨细胞方向分化,同时观察大黄素对骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的影响,包括其对基质细胞成骨分化后碱性磷酸酶含量和骨钙素含量的影响.3大黄素对骨髓基质细胞向脂肪细胞方向分化的影响:16只3月龄SD大鼠随机分成4组:对照组、激素组、复方碳酸钙治疗组、大黄素治疗组,每组4只.对照组灌胃给予溶剂对照;激素组灌胃给予溶剂对照和泼尼松3mg/kg;复方碳酸钙治疗组灌胃给予碳酸钙375mg/kg+VitD<,3>250U/kg和泼尼松3mg/kg;大黄素治疗组灌胃给予大黄素270mg/kg和泼尼松3mg/kg.所有动物均给药90天.给药结束后分离股骨收集骨髓基质细胞.骨髓基质细胞传代培养后应用油红O染色法及RT-PCR的方法法判断骨髓基质细胞是否向脂肪细胞方向分化,同时观察大黄素对骨髓基质细胞成脂分化的影响,包括其对骨髓基质细胞成脂分化后脂肪细胞的数目和脂蛋白脂酶mRNA表达的影响.结论 大黄素可以促进成骨细胞表达碱性磷酸酶、增加胶原的合成和刺激成骨细胞分泌骨钙素,还可上调成骨细胞的骨保护蛋白mRNA的表达.大黄素对成骨细胞的作用与药物的浓度有关,低浓度时有促进作用,高浓度时抑制成骨细胞的增殖和胶原的合成,降低细胞外钙的含量.大黄素能促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化,这一作用主要体现在骨形成过程的早期,对矿化期没有促进作用.体内给予糖皮质激素后,骨髓基质细胞体外培养时自发向脂肪细胞方向分化的能力和经体外诱导后向脂肪细胞方向分化的能力都明显增强,脂蛋白脂酶mRNA的表达明显升高,大黄素能下调脂蛋白脂酶mRNA的表达,可能有对抗糖皮质激素等成脂诱导剂的成脂诱导作用,大黄素的这一作用强于复方碳酸钙.