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乳腺分泌上皮细胞是乳腺中唯一能够合成、分泌乳汁的细胞，体外培养的具有分泌功能的乳腺分泌上皮细胞是研究乳腺泌乳功能的重要工具。本研究通过活体采集崂山奶山羊乳腺组织，利用组织块贴壁法获得原代乳腺上皮细胞，纯化后通过显微操作法对乳腺上皮细胞进行单克隆培养，并通过形态观察、生长曲线绘制、广谱角蛋白和波形蛋白免疫荧光染色、相关基因的RT-PCR等方法对单克隆细胞系进行鉴定，以获得彻底纯化的奶山羊乳腺分泌上皮细胞系。以崂山奶山羊不同泌乳时期乳腺组织miRNA高通量测序数据为基础，分析miR-200c与ACACA基因的靶向关系。以崂山奶山羊单克隆乳腺分泌上皮细胞为试验材料，通过载体构建和细胞转染，利用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因系统及Western-blot等方法验证miR-200c与ACACA基因的靶向关系。主要研究结果如下：（1）采用组织块培养法分离得到了崂山奶山羊原代乳腺上皮细胞，初步纯化后，利用显微操作法，获得并扩繁了乳腺分泌上皮细胞的单克隆培养体系；（2）单细胞克隆培养获得的奶山羊乳腺分泌上皮细胞，形态整齐、生长旺盛，具有典型的上皮细胞形态特征和‘S’型细胞生长曲线，广谱角蛋白和波形蛋白表达均呈阳性，并且能够表达ACACA基因和β-酪蛋白基因；（3）不同泌乳时期乳腺组织miRNA高通量测序数据显示，miR-200c在不同泌乳时期表达量差异显著，靶基因预测结果显示miR-200c与ACACA基因3′UTR存在一个互补结合位点；（4）qRT-PCR结果显示，miR-200c成功转染细胞并过表达；转染miR-200c mimic的细胞中，ACACA基因的表达量低于对照组，而miR-200c inhibitor转染组的ACACA基因表达量高于miR-200c mimic组；结果表明miR-200c的表达量与ACACA基因的表达量呈负相关；（5）双荧光素酶报告基因系统检测结果显示，共转染miR-200c mimic和ACACA-3′UTR野生型荧光素酶报告基因载体，其荧光素酶活性极显著低于miR-200cmimic和ACACA-3′UTR突变型载体的共转染组（P<0.01），同时显著低于miR-200cinhibitor和ACACA-3′UTR野生型荧光素酶报告基因载体的共转染组（P<0.05）。结果表明miR-200c mimic可与预测到的ACACA-3′UTR作用位点结合，并抑制荧光素酶的表达；（6）Western-blot结果显示，miR-200c mimic转染组中ACACA的表达量低于对照组，而miR-200c inhibitor转染组中ACACA的含量高于miR-200c mimic转染组；结果表明，转染miR-200c mimic可以降低ACACA的蛋白表达量。综上所述，本研究成功建立了单克隆崂山奶山羊乳腺分泌上皮细胞系，并以此为基础验证了miR-200c对ACACA基因的靶向结合及负调控作用。