自体骨髓间充质干细胞来源的血管内皮细胞联合半乳糖凝集素-3移植治疗下肢缺血的初步研究

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目的:建立兔下肢缺血模型,应用自体骨髓间充质干细胞定向诱导分化为的血管内皮细胞细胞,联合半乳糖凝集素-3移植于下肢缺血模型中,观察下肢缺血模型中血管新生的效果,探讨自体血管内皮细胞移植治疗兔下肢缺血的可行性。方法:(1)采用骨髓穿刺的方法在16只新西兰大白兔右下肢获取骨髓标记并记录,密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化得到骨髓间充质干细胞,采用第3代生长性状稳定的骨髓间充质干细胞,VEGF联合bFGF定向诱导分化为血管内皮细胞,流式细胞术检测CD31和vWF的表达率。(2)采用新西兰大白兔左下肢髂总动脉部结扎的方法建立新西兰大白兔左下肢缺血模型(3)将建立下肢缺血模型的16只新西兰大白兔随机分为实验组(n=8)和对照组(n=8),在缺血模型建立后第16天,在缺血下肢均匀选取15个点,实验组注射自体血管内皮细胞及半乳糖凝集素-3,对照组注射生理盐水,3周后行DSA造影观察缺血下肢血管。(4)造影结束后处死新西兰大白兔并留取缺血下肢标本,HE染色并计数毛细血管密度及毛细血管数/肌纤维数比值。结果:(1)流式细胞术检测CD31表达率为97.3±0.8%,vWF表达率为95.7%±1.1%,新西兰大白兔骨髓间充质干细胞成功定向分化为血管内皮细胞。(2)DSA造影显示实验组下肢血管明显多于对照组(P<0.05)。(3)HE染色结果实验组毛细血管密度及毛细血管数/肌纤维数比值均高于对照组(P<0.05)。结论:(1)兔骨髓间充质干细胞可以定向分化为血管内皮细胞作为组织工程的种子细胞。(2)自体血管内皮细胞联合半乳糖凝集素-3移植比对照组更多的介导缺血下肢的新生血管生成。
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