锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)是生物体细胞的重要抗氧化酶之一。其通过非细胞毒性机制抑制肿瘤生长,也能清除电离辐射诱导产生的超氧阴离子自由基(O-2·),被学者认为是很有应用前景的抑癌基因和抗辐射基因。骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCS)具有多向分化的可塑性,体外培养贴壁生长,易于采集和分离扩增,连续传代不易丢失其干细胞特性,有向骨髓归巢的特点,回输体内后可定位于骨髓并通过自我更新而长期存活,可在体内、外表达多种治疗性的外源目的基因而不明显影响其干细胞特性,植入反应较弱。因此,骨髓MSCS被认为是一种理想的基因治疗靶细胞。本文从人肝癌细胞株HuH-7中提取mRNA,采用半巢式PCR方法扩增人MnSOD cDNA,将克隆的基因片段插入载体pMD18-T内的XhoⅠ/XbaⅠ位点,酶切分析和序列测定正确后,经XhoⅠ、XbaⅠ双酶切T4连接酶连接,构建真核表达载体pEGFP-MnSOD;脂质体介导将pEGFP-MnSOD质粒转入体外培养的大鼠骨髓MSCS,通过绿色荧光细胞计数计算转染效率,RT-PCR检测目的基因表达,G418筛选目的基因转染克隆;对转染细胞以不同剂量x线照射,通过MnSOD活性、细胞存活率及DNA凝胶电泳分析,探讨MnSOD基因转染对骨髓MSCS的辐射保护作用。结果显示:凝胶电泳、序列测定证实MnSOD基因扩增正确,真核表达载体pEGFP-MnSOD构建成功;荧光显微镜观察和RT-PCR证实MnSOD基因成功转入体外分离培养的骨髓MSCS;MnSOD活性、细胞存活率及凝胶电泳特异性条带分析初步证实MnSOD基因转染对大鼠骨髓MSCS有辐射保护作用,为MnSOD转基因的基础和应用研究奠定了一定的实验基础。