【摘 要】
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p300是一种重要的组蛋白乙酰化酶,在基因转录调控中起着重要作用,它参与了许多基因的表达调控.组蛋白的高乙酰化通常与基因活化有关,而组蛋白的低乙酰化往往与基因活性的抑制
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p300是一种重要的组蛋白乙酰化酶,在基因转录调控中起着重要作用,它参与了许多基因的表达调控.组蛋白的高乙酰化通常与基因活化有关,而组蛋白的低乙酰化往往与基因活性的抑制密切相关.验证了p300能够提高IL-12启动子的活性,并且能够与转录因子p65协同作用,明显提高IL-12 p40启动子启动的荧光素酶活性,另一方面,这种协同作用可以由多种去乙酰化酶(HDAC)所抑制.为进一步研究p300在基因转录调控中的作用,我们针对p300进行了RNAi实验.首先,构建了两个不同的siRNA表达质粒,但在RNA和蛋白两个水平检测后,结果发现p300的表达并没有明显地被抑制.随后,针对p300基因的mRNA设计了两段dsDNA,采用RNase Ⅲ体外酶切方法获得siRNAs,转染至293T细胞中诱发RNAi,RT-PCR结果证明其中一段dsDNA转录、酶切所获得的siRNAs对p300基因的表达有明显的抑制效果,为进一步研究p300在转录调控中的作用奠定了基础.
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