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目的本课题旨在从脾肾亏虚、痰瘀互结角度探讨阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）病机,阐明以健脾益肾、化痰祛瘀为治法的加减薯蓣丸（Modified Shuyu Pill,MSP）治疗AD的理论依据;并运用行为学、病理形态学、分子生物学的研究方法,从基因、凋亡信号通路PI3K/Akt/Bcl-2、炎症信号通路TLR4/MyD88/NF-κB角度,探讨加减薯蓣丸对AD模型大鼠学习记忆能力、海马组织病理损伤、神经细胞凋亡及胶质炎性反应的作用及机理,为中医药治疗AD的研究提供理论基础及实验依据。方法1.理论探讨:系统回顾和总结了中医古籍及现代学者对AD的认识,探讨AD发病脾肾亏虚、痰瘀互结的病机认识,从组方分析、团队前期研究成果及药物药理作用机制角度,阐明以健脾益肾、化痰祛瘀为治法的加减薯蓣丸治疗AD的理论依据。2.实验研究:SPF级雄性SD大鼠48只,采用脑立体定位仪下大鼠侧脑室注射Aβ1-42寡聚体法建立AD动物模型,造模7天后,水迷宫检测筛选造模成功大鼠30只,随机分为模型组、西药组和中药组,每组10只。西药组给予盐酸多奈哌齐0.45 mg·kg-1·d-1灌胃,中药组给予加减薯蓣丸10g·kg-1·d-1灌胃,模型组及假手术组（仅侧脑室注射生理盐水2μL）给予生理盐水10 mL·kg-1·d-1灌胃,连续给药4周。药物干预4周后,采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。行为学检测结束后,大鼠灌注取脑以用于病理学检测及免疫荧光染色。尼氏染色（Nissl）观察大鼠海马神经元尼氏体水平;原位末端标记检测（TUNEL）观察海马神经元凋亡情况;免疫荧光染色检测大鼠海马CA1区Iba1、GFAP蛋白的表达。冰上断头开颅取脑以用于Western Blot及实时荧光定量PCR检测。Western Blot检测大鼠海马PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马PI3K、Bcl-2、Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA及miR-34a-5p表达水平。结果1.Morris水迷宫检测:水迷宫定位航行试验第1-5天,各组大鼠逃避潜伏期均逐渐缩短;在第6天的试验中,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期显著延长（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组逃避潜伏期均显著缩短（P<0.01）;而中药组和西药组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。空间探索试验显示,与假手术组比较,模型组穿越平台次数及原平台象限停留时间比均显著减少（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组穿越平台次数及原平台象限停留时间比均显著增加（P<0.01）;而中药组和西药组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.Nissl染色:假手术组大鼠海马CA1区神经细胞尼氏体呈蓝紫色,细胞核呈蓝色,染色清晰;与假手术组比较,模型组尼氏体数量减少,染色浅;与模型组比较,西药组及中药组尼氏体数量增多,染色较清晰。3.TUNEL检测:凋亡的细胞呈红色荧光,细胞核呈蓝色荧光。假手术组大鼠海马CA1区凋亡神经细胞数量少;与假手术组比较,模型组凋亡神经细胞数量增多;与模型组比较,西药组及中药组凋亡神经细胞数量减少。大鼠海马CA1区细胞凋亡率结果显示,与假手术组比较,模型组细胞凋亡率显著增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组细胞凋亡率均显著减少（P<0.01）;与西药组比较,中药组细胞凋亡率减少更为明显（P<0.01）。4.免疫荧光染色:与假手术组比较,模型组Iba1、GFAP的表达明显升高（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组Iba1、GFAP的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与西药组比较,中药组Iba1、GFAP表达降低更为明显（P<0.05）。5.Western Blot检测:与假手术组比较,模型组PI3K、p-Akt、Bcl-2表达明显降低（P<0.01）,Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κBp65、IL-1β、TNF-α的表达明显升高（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组PI3K、p-Akt、Bcl-2表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κBp65、IL-1β、TNF-α的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与西药组比较,中药组PI3K、Bcl-2表达升高更为明显（P<0.05,P<0.01）,caspase-3、TLR4、MyD88、TNF-α表达降低更为明显（P<0.05,P<0.01）;而Akt的表达在4组间比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。6.实时荧光定量PCR检测:与假手术组比较,模型组PI3K、Bcl-2表达明显降低（P<0.01）,Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、miR-34a-5p的表达明显升高（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组PI3K、Bcl-2表达明显升高（P<0.01）,Bax、caspase-3、TLR4、MyD88、NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、miR-34a-5p的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与西药组比较,中药组TLR4、MyD88、IL-1β、TNF-α表达降低更为明显（P<0.05,P<0.01）。结论1.脾肾亏虚、痰瘀互结是AD发病的基本病机,以健脾益肾、化痰祛瘀为治法的加减薯蓣丸治疗AD具有丰富的理论依据;2.加减薯蓣丸能有效改善AD模型大鼠空间学习记忆能力及海马组织病理损伤;3.加减薯蓣丸能够调节PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的表达,进而抑制AD模型大鼠海马神经细胞凋亡;4.加减薯蓣丸能够调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的表达,进而抑制AD模型大鼠海马胶质炎性反应;5.加减薯蓣丸能够调节miR-34a-5p表达,进而影响miR-34a-5p/PI3K/Akt、miR-34a-5p/TLR4信号,发挥抗AD作用。