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本试验通过免疫学试验研究了蒸汽处理前后的纯化大豆抗原的免疫学特性,找出了大豆中导致动物致敏反应的主要的抗原物质。利用免疫学方法从蒸汽处理前后的大豆中分离提纯出大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE进行分析鉴定。将经过鉴定后的纯化抗原皮下注射给18～22g的昆明小鼠,利用琼脂扩散实验来检测所得抗血清与原有抗原是否发生免疫应答反应。通过对小鼠血清中大豆抗原特异性抗体IgG滴度的测定,定量检测其在小鼠体内产生特异性抗体的程度。 本试验利用免疫学方法分别从生、熟(120℃,7′30″)大豆中分离纯化大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白,经琼脂糖CL-6B凝胶层析后,分别得到纯化的大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白及其相邻馏分,依次称为生大豆11S组分一峰和二峰,生大豆7S组分一峰和二峰,熟大豆11S组分一峰和二峰,熟大豆7S组分一峰和二峰。经电泳鉴定后可知,生大豆11S二峰和7S一峰分别为大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白,它们是大豆中存在的两种主要抗原物质。 提纯曲线结果表明,生豆粉经过蒸汽处理后,大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的含量均有所下降,说明热处理可在一定程度上破坏大豆的抗原物质。处理后大豆球蛋白的含量明显减少,而β-伴大豆球蛋白的含量变化不大。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳可初步确定以上结论。 SDS-PAGE结果表明,生大豆主要蛋白质成分集中于11S二峰和7S一峰处,熟大豆7S二峰电泳带与生大豆7S带相差不大,说明热处理对其破坏程度较小。 试验中选取45只12～13日龄的昆明小鼠,所有小鼠在断乳后饲喂不含豆类蛋白的日粮,饲养35日后,体重达18～22g时进行随机分组,将小白鼠随机分成9组,每组5只,雌雄随机。分别给各纽小鼠免疫8种提纯抗原,第9组设为对照。首次免疫后每隔10日加强免疫一次,加强免疫前随机选鼠采血,分离血清,测定效价。第四次免疫后第10日腋下采血,分离出血清,以进行琼脂扩散试验和ELISA。 取免疫8种大豆提纯抗原所得的相应标准免疫血清及对照血清,对抗原与相应血清进行琼脂扩散试验,结果表明,大豆球蛋白的抗血清与β-伴大豆球蛋白无交叉反应;反之,β-伴大豆球蛋白的抗血清与大豆球蛋白亦无交叉反应。生大豆11S二峰、7S一峰、7S二峰免疫后所得血清与其相应抗原发生反应,说明动物受此种抗原作用后机体内可产生相应抗体,发生免疫应答;经过120℃7′30″蒸汽处理后,11S两峰产物和7S一峰产物免疫后的抗血清与其相应抗原不发