【摘 要】
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本研究的目的是确定屎肠球菌EF1细胞壁脂磷壁酸提取和纯化的适宜条件,为获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸提供切实可行的方法。采用活菌计数法研究屎肠球菌EF1的生长规律;用离心法收集细菌细胞研究细菌生物量;用水饱和正丁醇提取脂磷壁酸,研究细胞破壁时间和正丁醇萃取时间对提取物得率的影响;研究疏水作用层析和离子交换作用层析对脂磷壁酸的纯化效果,为日后获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸用于机理研究奠定基础。主要研
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本研究的目的是确定屎肠球菌EF1细胞壁脂磷壁酸提取和纯化的适宜条件,为获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸提供切实可行的方法。采用活菌计数法研究屎肠球菌EF1的生长规律;用离心法收集细菌细胞研究细菌生物量;用水饱和正丁醇提取脂磷壁酸,研究细胞破壁时间和正丁醇萃取时间对提取物得率的影响;研究疏水作用层析和离子交换作用层析对脂磷壁酸的纯化效果,为日后获取高纯度且质量稳定的脂磷壁酸用于机理研究奠定基础。主要研究结果如下:(1)屎肠球菌EF1在MRS培养基37℃静止培养24 h达到对数生长末期,36 h之后进入稳定期。在对数生长末期的生物量最高,为3.22 g/L,比稳定期增加22.43%(P<0.01)。细菌离心15 min得到的生物量比12 min提高12.20%(P>0.05)。(2)细胞破壁70 min和正丁醇提取60 min的屎肠球菌EF1的脂磷壁酸得率最高,为2.27%(P<0.01)。(3)屎肠球菌EF1的脂磷壁酸粗提物用辛基琼脂糖凝胶层析时,用35%正丙醇乙酸钠缓冲液洗脱脂磷壁酸比用15-60%线性梯度洗脱效果更好。DEAE离子交换层析对脂磷壁酸的进一步纯化效果不明显。结论:屎肠球菌EF1宜在对数生长末期收获,离心15 min收集细胞。细胞破壁时间和正丁醇提取时间对该菌株的脂磷壁酸提取得率有显著交互效应。脂磷壁酸粗提物用辛基琼脂糖凝胶层析时,适宜采用等度洗脱,不必要再进行DEAE离子交换层析。
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