基因毒性杂质具有低浓度、高风险特征,将对人体产生强烈遗传毒性作用,且严重影响药品质量。随着监管要求的日益严格,基因毒性杂质已成为累及药品研发成本和上市时间的重要负面因素。故通过对原料药所用基本原料及可能发生的副反应进行研究,并预先检测以确定原料药中可能存在或潜在的基因毒性杂质势在必行。本研究课题源于上海市某医药公司原料药项目的子课题“原料药分析方法的开发与验证”,针对公司的生产要求和实际因素,需开发一组经济实惠的原料药基因毒性杂质分析方法,以满足双方认可的验证方案。鉴此,本文分别选用高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用法检测原料药中的甲醛和对氨基苯磺酸钠,并对方法进行优化。在基于基质效应和方法学验证角度的前提下,本文对两种方法分别进行了系统适用性、精密度、线性、准确度、耐用性等考察指标,结果表明两种方法都具有较低的检测限及较好的回收率和精密度,即具有较好的准确度和可靠性,可满足检测要求。利用这两种方法检测原料药中的目标物残留量,所得结论如下:(1)对于基因毒性杂质甲醛:在样品前处理和液相色谱条件优化的基础上,再对高效液相色谱检测甲醛的方法进行方法学验证。结果表明:方法系统适应性和专属性良好,高效液相色谱峰型良好,与相邻峰间无干扰,加标样品保留时间与标准溶液中目标物保留时间一致;最低检测限为0.02μg/mL,定量限达0.04μg/mL;方法线性良好,线性范围为0.04-0.30μg/mL(线性相关系数r=0.9999);在高、中、低三个浓度的加标回收率试验中,平均回收率为95.0%;在重复性和中间精密度试验中,相对标准偏差(RSD)分别为1.8%和1.2%;在耐用性和溶液稳定性试验中,方法表现出可靠性。(2)对于潜在基因毒性杂质对氨基苯磺酸钠:在质谱和液相色谱条件选择优化的基础上,再对超高效液相色谱-质谱联用检测对氨基苯磺酸钠的方法进行方法学验证。结果表明:方法系统适应性良好,目标物分离效果明显,与相邻峰间无干扰,加标样品保留时间与标准溶液中目标物保留时间一致;最低检测限为9.8680 ng/mL,定量限达29.6039 ng/mL;方法线性良好,线性范围为0.03-0.05μg/mL(线性相关系数r=0.9986);在高、中、低三个浓度的加标回收率试验中,平均回收率为84.1%;在重复性和中间精密度试验中,相对标准偏差(RSD)分别为7.3%和2.9%;在耐用性和溶液稳定性试验中,方法表现出可靠性。(3)经过连续四批样品的检测,结果表明甲醛在原料药中的残留量为4-18 mg/kg,而对氨基苯磺酸钠在原料药中无残留。