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耧斗菜(Aquilegia viridiflora pall)为毛莨科耧斗菜属多年生草本植物,全草入药,是蒙古族民间药食两用植物。一般5-6月份可以采集其嫩茎叶作为野生蔬菜食用,具有丰富的营养物质,7-8月份采摘晾干入药,具有调经止血、清热解毒、治伤、止痛等作用。耧斗菜在内蒙古地区分布广泛,在民间使用历史悠久,易于采摘,易于辨认,本研究将在前人的研究基础上主要补充及分析耧斗菜的有效成分含量及随着采摘时期的变化和生物碱的结构鉴定。本研究以蒙古族药食两用植物耧斗菜(Aquilegia viridiflora Pall.)为材料,测定不同采摘时期的生物碱含量、黄酮含量、维生素C含量、蛋白质含量以及不同生长时期的总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P X)含量、过氧化氢酶(CAT)含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量,并对上述各项进行动态变化分析;测定耧斗菜乙醇提取物对黑腹果蝇寿命的影响及其体内CAT, SOD和丙二醛(MDA)含量的影响;设计正交试验探索提取分离耧斗菜总生物碱的最佳工艺条件;用高效气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,对耧斗菜总生物碱进行分离纯化和结构鉴定。通过本研究,丰富和完善耧斗菜有效成分的研究内容为其临床应用提供科学依据,让耧斗菜发挥更大的应用价值,揭示有效成分的季节性变化规律,为合理的采收,保护民族药食两用植物资源提供科学思路和实验数据。研究结果如下;1耧斗菜代谢物含量的动态研究耧斗菜采摘时间为2014年的5月13日、6月5日、6月28日、7月21日、8月13日。通过实验研究发现,耧斗菜生物碱含量在8月13日时最高;黄酮含量在6月28日时最高;蛋白质含量在7月21日时最高;维生素C含量在6月5日时最高:T-AOC含量在8月13日达到最高点;T-SOD含量在6月28日时最高;CAT含量在8月13日时最高;GSH-PX含量在7月21日达到最高值。综合耧斗菜代谢物及酶活性的动态变化研究,发现在5月初至6月末,耧斗菜中维生素C含量、蛋白质含量和黄酮含量都较高,生物碱含量较低,故此时间段为耧斗菜最佳食用时期。在7月份和8月份时,生物碱含量富集达到最高点,不宜食用,可进行采摘入药,故此时间段为耧斗菜的最佳采摘入药期。2耧斗菜体内抗氧化活性的研究用浓度为0.06 mg/100 mg的耧斗菜乙醇提取物喂养雌果蝇和雄果蝇,发现实验组寿命分别延长了10天和3天,雌果蝇和雄果蝇实验组平均延寿率是16.32%和5.36%;用0.12 mg/100 mg浓度的耧斗菜乙醇提取物喂养雌果蝇和雄果蝇后发现实验组寿命分别延长了11天和4天,雌果蝇和雄果蝇实验组平均的延寿率是18.35%和5.84%。各浓度组耧斗菜乙醇提取物均能提高雌雄果蝇体内CAT、SO D的活性;均能减少MDA的含量。3耧斗菜生物碱的提取工艺研究采用热浸法,以乙醇为溶剂提取耧斗菜总生物碱,对影响耧斗菜总生物碱提取的四个主要因素—乙醇浓度、料液比、浸提时间和浸提温度进行单因素实验,得出每个因素最佳的水平,在采用最佳水平的各上下一级设计L9(34)正交实验,确立耧斗菜总生物碱的提取工艺。发现4个因素对耧斗菜总生物碱提取率的影响顺序为B=D>A>C,即浸提温度=乙醇浓度>浸提时间>料液比,较优实验组合为B2D2A2C2,即浸提温度为70℃、乙醇浓度为80%、浸提时间为60min、料液比为1:25。4耧斗菜总生物碱的分离纯化及结构鉴定耧斗菜乙醇提取液及乙醇超声波辅助提取液对生物碱定性试剂均有沉淀反应,乙醇超声波辅助提取液对于改良碘化铋钾试剂和Frob de试剂的定性反应较乙醇提取物明显。说明乙醇提取液和乙醇超声波辅助提取液中均含有生物碱,而超声波辅助提取比单纯乙醇溶剂提取法更具有优越性。我们从耧斗菜总生物碱乙醇提取液中共分离出2种生物碱,均为希夫碱类化合物,分别是酰腙类希夫碱2,6-二甲氧基苯甲醛氨甲酰腙和酰肼类希夫碱2-(3-对氯苯氧)N-(-2,4二甲氧基苄叉)乙酰肼。综上所述,通过对耧斗菜的基础性研究,分别确立了耧斗菜的最佳食用和药用采摘时间。综合考虑认为,食用耧斗菜时候选择生物碱含量较低且蛋白质和维生素C含量较高的以6月份为宜,而采摘药材时候选择生物碱含量较高的8月份为宜;耧斗菜乙醇提取物对黑腹果蝇具有延寿抗衰老作用;耧斗菜总生物碱的最佳提取工艺为:浸提温度为70℃、乙醇浓度为80%、浸提时间为60min、料液比为1:25;从耧斗菜乙醇提取物中分离出2种希夫碱类生物碱。上述实验结果为耧斗菜有效成分的研究及合理的开发利用提供了实验数据。