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霉菌毒素是霉菌产生的一类天然有毒代谢物或次生代谢物。受自然因素的影响，霉菌毒素广泛存在于农产品和饲料中，即使浓度很低，它们仍可通过被进食后进入人体内从而对人体产生巨大的危害。桔青霉素和玉米赤霉烯酮属于霉菌毒素的一种，且可能共存于单一农产品中，造成更大的潜在威胁。因此欧盟及中国等国家已明确规定这两种霉菌毒素的法定限量值。
本论文在建立多靶标胶体金免疫层析检测法的基础上，更换抗体标记材料建立了基于铕的多靶标荧光免疫层析法对桔青霉素和玉米赤霉烯的同时检测。获得的结果如下：
1、采用碳二亚胺法合成玉米赤霉烯酮人工抗原，需要先制备出玉米赤霉烯酮半抗原，即ZEN-CMO。以ZEN-CMO为起始物，与载体蛋白BSA/HSA进行偶联反应，分别合成出免疫原ZEN-HSA和包被原ZEN-BSA。桔青霉素化学结构中的羧基是自身的功能性基团不能被破坏，因此不能采用碳二亚胺法而采用甲醛加成法合成桔青霉素人工抗原。以CIT为起始物，载体蛋白BSA/HSA进行偶联反应，分别合成出免疫原CIT-HSA和包被原CIT-BSA。
2、以合成出的免疫原ZEN-HSA和CIT-HSA采用常规的动物免疫实验方案去免疫Babl/c小鼠。综合效价和灵敏度两个方面，以ZEN-HSA免疫的小鼠中选择Z-1号小鼠进行冲击免疫和以CIT-HSA免疫的小鼠中选择C-2号小鼠进行冲击免疫，进行后续的细胞融合试验。通过亚克隆技术筛选过后，分别选取了3株能针对ZEN分泌稳定抗体的杂交瘤细胞株和4株能针对CIT分泌稳定抗体的杂交瘤细胞株生产小鼠腹水，并通过辛酸-硫铵法纯化得到特异性抗体。纯化后的抗体进行鉴定，从ZEN和CIT杂交瘤细胞株对应的抗体中选出效价和灵敏度最佳的抗体8B3和4B9。
3、用以获得的ZEN和CIT特异性单克隆抗体制备了多靶标胶体金免疫层析检测技术。该方法同时检测ZEN和CIT的结果为：ZEN的肉眼检测限为50ng/mL，IC50值为9.05ng/mL，仪器检测限为1.66ng/mL；CIT的肉眼检测限为25ng/mL，IC50值为4.29ng/mL，仪器检测限为0.72ng/mL。在对试纸条特异性检测的确认实验中，验证了7种霉菌毒素，除了ZEN和CIT两种霉菌毒素对其它5种霉菌毒素没有明显的交叉反应，可体现出本研究制备的多靶标胶体金免疫层析试纸条能够灵敏且准确的同时检测ZEN和CIT。
4、本研究在制备多靶标胶体金免疫层析试纸的基础上，通过将标记材料胶体金更换为具有更好特性的铕纳米粒子与试纸条结合来制备多靶标荧光免疫层析试纸条。在最佳实验条件下，ZEN的肉眼检测限为5ng/mL，IC50值为0.755ng/mL，仪器检测限为0.078ng/mL；CIT的肉眼检测限为2.5ng/mL，IC50值为0.353ng/mL，仪器检测限为0.035ng/mL。并通过特异性交叉反应时间验证了该试纸条，能够同时检测ZEN和CIT而对其他霉菌毒素没有交叉反应。验证添加回收实验后，加标浓度的批内分析，CIT的平均回收率为86.3%至109.0%，RSD小于7.6%。相比之下，ZEN的平均回收率为88.7%至114.4%，RSD小于4.2%。对于批间分析，CIT的平均回收率为96.5%至111.6%，RSD小于9.9%。相比之下，ZEN的平均回收率为86.6%至110.9%，RSD小于6.1%，表明本研究建立的多靶标荧光免疫层析试纸条是能够准确的同时检测ZEN和CIT的。
本论文采用杂交瘤细胞技术，制备出抗ZEN和抗CIT的两种特异性单克隆抗体，并建立了多靶标胶体金免疫层析检测技术和多靶标荧光免疫层析检测技术，为ZEN和CIT两种霉菌毒素的同时检测提供了更灵敏和准确可靠的方法。
本论文在建立多靶标胶体金免疫层析检测法的基础上，更换抗体标记材料建立了基于铕的多靶标荧光免疫层析法对桔青霉素和玉米赤霉烯的同时检测。获得的结果如下：
1、采用碳二亚胺法合成玉米赤霉烯酮人工抗原，需要先制备出玉米赤霉烯酮半抗原，即ZEN-CMO。以ZEN-CMO为起始物，与载体蛋白BSA/HSA进行偶联反应，分别合成出免疫原ZEN-HSA和包被原ZEN-BSA。桔青霉素化学结构中的羧基是自身的功能性基团不能被破坏，因此不能采用碳二亚胺法而采用甲醛加成法合成桔青霉素人工抗原。以CIT为起始物，载体蛋白BSA/HSA进行偶联反应，分别合成出免疫原CIT-HSA和包被原CIT-BSA。
2、以合成出的免疫原ZEN-HSA和CIT-HSA采用常规的动物免疫实验方案去免疫Babl/c小鼠。综合效价和灵敏度两个方面，以ZEN-HSA免疫的小鼠中选择Z-1号小鼠进行冲击免疫和以CIT-HSA免疫的小鼠中选择C-2号小鼠进行冲击免疫，进行后续的细胞融合试验。通过亚克隆技术筛选过后，分别选取了3株能针对ZEN分泌稳定抗体的杂交瘤细胞株和4株能针对CIT分泌稳定抗体的杂交瘤细胞株生产小鼠腹水，并通过辛酸-硫铵法纯化得到特异性抗体。纯化后的抗体进行鉴定，从ZEN和CIT杂交瘤细胞株对应的抗体中选出效价和灵敏度最佳的抗体8B3和4B9。
3、用以获得的ZEN和CIT特异性单克隆抗体制备了多靶标胶体金免疫层析检测技术。该方法同时检测ZEN和CIT的结果为：ZEN的肉眼检测限为50ng/mL，IC50值为9.05ng/mL，仪器检测限为1.66ng/mL；CIT的肉眼检测限为25ng/mL，IC50值为4.29ng/mL，仪器检测限为0.72ng/mL。在对试纸条特异性检测的确认实验中，验证了7种霉菌毒素，除了ZEN和CIT两种霉菌毒素对其它5种霉菌毒素没有明显的交叉反应，可体现出本研究制备的多靶标胶体金免疫层析试纸条能够灵敏且准确的同时检测ZEN和CIT。
4、本研究在制备多靶标胶体金免疫层析试纸的基础上，通过将标记材料胶体金更换为具有更好特性的铕纳米粒子与试纸条结合来制备多靶标荧光免疫层析试纸条。在最佳实验条件下，ZEN的肉眼检测限为5ng/mL，IC50值为0.755ng/mL，仪器检测限为0.078ng/mL；CIT的肉眼检测限为2.5ng/mL，IC50值为0.353ng/mL，仪器检测限为0.035ng/mL。并通过特异性交叉反应时间验证了该试纸条，能够同时检测ZEN和CIT而对其他霉菌毒素没有交叉反应。验证添加回收实验后，加标浓度的批内分析，CIT的平均回收率为86.3%至109.0%，RSD小于7.6%。相比之下，ZEN的平均回收率为88.7%至114.4%，RSD小于4.2%。对于批间分析，CIT的平均回收率为96.5%至111.6%，RSD小于9.9%。相比之下，ZEN的平均回收率为86.6%至110.9%，RSD小于6.1%，表明本研究建立的多靶标荧光免疫层析试纸条是能够准确的同时检测ZEN和CIT的。
本论文采用杂交瘤细胞技术，制备出抗ZEN和抗CIT的两种特异性单克隆抗体，并建立了多靶标胶体金免疫层析检测技术和多靶标荧光免疫层析检测技术，为ZEN和CIT两种霉菌毒素的同时检测提供了更灵敏和准确可靠的方法。