论文部分内容阅读
第一章对转Bt基因作物的抗虫性、害虫对转Bt基因作物的抗性发展、抗性治理策略以及AFLP的研究进展等方面进行了阐述。第二章为棉铃虫对转基因棉高抗品系和敏感品系的筛选。采用Bt棉叶片喂饲法进行棉铃虫对转Bt基因棉抗性筛选74代后,继续经15代筛选,棉铃虫对21%MVPⅡWP(Bt毒素Cry1Ac)的抗性由第74代的2523.24倍上升到第89代的7310.8倍。采自偃师的棉铃虫(YCS)在室内饲养73代后,对其进行了三代单对筛选,得到的敏感品系的LD50值为0.15μg/mL,敏感性略高于湖北敏感品系(0.20μg/mL)。第三章为棉铃虫基因组DNA的提取。CTAB法提取的棉铃虫基因组DNA能够符合AFLP分析的要求,主要包括组织消化、CTAB去多糖、氯仿/异戊醇除蛋白、PEG沉淀DNA、TE重溶DNA沉淀以及RNA酶消化RNA等过程;该方法提取的棉铃虫基因组DNA的A260/A280比值绝大部分在1.7-1.9之间,EcoRⅠ/MseⅠ双酶切的产物大小主要为50-1000bp。第四章为影响AFLP-银染法的因素及其对策。探讨了几种药品在聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)银染过程中的作用原理,利用单药品实验对各个药品在银染过程所起的作用进行分析,获得了不同药品所对应的实验现象,有效地解决AFLP银染中药品的质量问题。第五章为棉铃虫AFLP图谱的构建。利用AFLP分子标记方法,对棉铃虫Helicoverpa armigera回交一代BC1[F1♀(♀YCR×♂YCS)×♂YCR]群体进行连锁图谱的构建。经23组AFLP引物的选择性扩增,共得到406个多态位点,卡方检验后有217个为有效位点。利用Mapmaker/Exp(Version 3.0b)软件作连锁分析,其中126个标记分属35个连锁群,连锁群标记数变化范围是2-11个,平均每个连锁群标记数为3.6个,该图覆盖的基因组长度为1138.4 cM(图距单位),连锁群长度变化范围为4.0-166.1cM,连锁群的平均长度为32.53cM。第六章利用AFLP分子标记方法,在连锁图谱上进行了抗Bt基因的定位,该基因被定位于第15连锁群上,,发现与EaaMcta02和EaaMcta03两个标记连锁,遗传图距分别为10.40 cM和13.90 cM。本研究结果将为制定棉铃虫对转Bt基因棉的抗性监测及抗性治理方案提供了一个依据。