论文部分内容阅读
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)即是抗体,1964 年国际卫生组织把具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白。在机体内Ig 主要以分泌型和膜型两种形式存在,前者主要存在于血液、组织液及外分泌液中发挥各种免疫功能;后者存在于B细胞表面,是B 细胞表面标志之一。Ig 是机体免疫应答中产生的重要效应分子,其所介导的体液免疫在机体抵抗外来病源中发挥了极其重要的作用。早在用X 射线晶体衍射技术来揭示Ig 结构之前,人们就已经对其结构进行了大量的研究与假设,并与结晶学实验所得结论一致。现在已能确定其基本结构模型:Ig 是由两条完全相同的重链和两条完全相同的轻链以多肽链间的二硫键固定而成的球蛋白,其重链与轻链各有其自己的可变区与恒定区。作为抗体,其可变区的多态性决定了其识别抗原的多态性。作为一种大分子糖蛋白,Ig 还是一种强的免疫原,并可根据其重链恒定区的免疫原性差异将其分为多种血清型。每个血清型Ig 所行使的功能也各不相同,通过对机体各种血清型Ig 的精确测定可以对机体所处的免疫状态进行评估。本研究所获得的牛免疫球蛋白G(IgG)、轻链(IgG-L)和重链(IgG-H)的抗血清可以在牛IgG 定量及定性检测中得到广范应用,这比应用传统检测方法准确得多,对于科学研究和实践应用都有很大的意义。本实验是应用盐析技术和离子交换层析技术直接从富含Ig 的牛初乳中分离纯化IgG,对传统方法进行了优化,可以快速大量获得高纯度的IgG,经过检测其纯度完全适用于免疫动物和下步工作。在此基础上我们应用化学方法裂解IgG 分子内肽链间的二硫键,并保留IgG单条肽链分子内的二硫键以保持其高级结构来维系其天然免疫原性,加入烷基化试剂对新生成的巯基进行烷基化防止其再度聚合,以此获得了大量的IgG-L、IgG-H 的混溶液。应用分子筛层析技术可以将轻、重链很好的分离开来,分离效果非常理想,获得了纯化的IgG-L 和IgG-H 肽链,并通过SDS-PAGE 测得其分子量分别为27.66 kD 和55.67KD。二者经浓缩后免疫家兔,获得兔抗牛IgG-L、IgG-H 抗血清,效价>1:16,免疫双扩散和免疫电泳均为特异性条带。