【摘 要】
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目的:建立检测外周血液(PB)和脑脊液(CSF)丙型肝炎病毒(HCV)和博尔纳病病毒(BDV)的巢式逆转录酶荧光定量聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)的方法,快速、准确地定量检测外周血液单个
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目的:建立检测外周血液(PB)和脑脊液(CSF)丙型肝炎病毒(HCV)和博尔纳病病毒(BDV)的巢式逆转录酶荧光定量聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)的方法,快速、准确地定量检测外周血液单个核细胞(PBMCs)和CSF HCVE1和BDVp24基因片段,进一步证实病毒性脑炎(VE)是否存在HCV或BDV感染。探讨宁夏及其周边地区绵羊是否存在BDV感染。对BDV阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析,绘制系统发生树,初探BDV感染的分子流行病学特征。方法:1、根据HCVE1基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的HCV基因片段克隆入载体,重组质粒经筛选、鉴定,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立检测HCV的FQ-nRT-PCR方法。2、应用FQ-nRT-PCR方法检测28例丙型病毒性肝炎、46例VE患者及42例对照者PBMCs和CSF HCV E1基因片段,并应用反向点杂交技术,对HCV感染的病例进行HCV基因型检测。3、应用徐平等开发的BDV重组质粒作为阳性模板,用于标准曲线
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