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目的 心房颤动的发生过程与心肌纤维化的进展密切相关,在心肌纤维化的发生发展过程中,心脏成纤维细胞(CFs)激活成为肌成纤维细胞并分泌细胞外基质(ECM)蛋白是心脏纤维化发展的关键,但具体机制尚不完全清楚。近年来大量研究表明表观遗传学在心脏纤维化的发生发展过程中起重要调控作用,其中microRNA以及DNA甲基化是重点研究对象。Micro RNA-152-3p是微小RNA中的一员,研究发现在肿瘤中microRNA-152-3p的表达与DNA甲基化修饰负相关,并且在肝纤维化以及肺纤维化中均有报道。DNA甲基化已被证明参与了心脏纤维化的发生发展。本课题通过研究DNMT1(DNA甲基化转移酶1)、microRNA-152-3p与心肌成纤维细胞活化增殖的关系以及在心肌纤维化中二者之间的可能关系,初步探究DNMT1和microRNA-152-3p在心肌纤维化进程中起到的作用。方法 :购入40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,均为8周龄健康状态,体重约为200±20g,随机将大鼠分为2组。其中ISO组(行异丙肾上腺素5mg/kg/d皮下注射模型组)20只、生理盐水组(等量生理盐水皮下注射组)20只,连续注射2周后取出心脏。运用HE、Sirius Red以及Masson染色的病理方法检测ISO组大鼠心脏是否有纤维化病变。提取SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)并培养,在TGF-β1刺激24-48h后,向CFs中瞬时转染microRNA-152-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitors)、DNMT1-si RNA(DNMT1小干扰)及相应的阴性对照物(NC),24～48h后处理细胞。运用Western blot法分别测定大鼠心脏以及CFs中α-SMA、CollagenⅠ、以及DNMT1蛋白的表达,qRT-PCR检测心脏组织以及CFs中miR-152-3p、DNMT1、CollagenⅠ和α-SMA的RNA水平表达,CCK-8法检测提取的心肌成纤维细胞的细胞活性。结果 与生理盐水组比较,ISO组中,HE、Sirius Red和Masson染色结果显示在心肌细胞的间质间有大量胶原沉积,排列紊乱;qRT-PCR结果显示miR-152-3p的表达量明显下降,CollagenⅠ、α-SMA和DNMT1的m RNA表达量明显增加;Western blot结果显示CollagenⅠ、α-SMA和DNMT1蛋白表达量增加。在体外实验中,在受到TGF-β1刺激的CFs活性增高明显,CollagenⅠ、α-SMA和DNMT1的表达升高,miR-152-3p的表达降低。在TGF-β1刺激后转染的各组CFs与NC组比较中,qRT-PCR提示在mimics组CFs中miR-152-3p的表达量增加,CollagenⅠ、α-SMA m RNA表达量降低,而在inhibitors组中miR-152-3p的表达量下降,CollagenⅠ、α-SMA m RNA表达量增高明显;qRT-PCR表明转染DNMT1-si RNA与其阴性对照比较,miR-152-3p的表达量增高。Western blot结果提示与阴性对照相比CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达在mimics组中降低,在inhibitors组中升高;CollagenⅠ、α-SMA和DNMT1的蛋白表达量在DNMT1-si RNA组中明显减少。CCK-8实验结果显示在inhibitors组中,CFs的细胞活性明显增强,在mimics组和DNMT1-si RNA组中CFs的细胞活性下降。结论 在ISO诱导的SD大鼠心脏纤维化模型中,CollagenⅠ、α-SMA和DNMT1表达量增加而miR-152-3p的表达量下降。体外细胞实验中,在经过TGF-β1活化后,miR-152-3p的高表达可以抑制CollagenⅠ、α-SMA的表达,低表达可促进CollagenⅠ、α-SMA的表达,而DNMT1的表达降低使miR-152-3p的表达上调。这些结果表明miR-152-3p可能对心肌纤维化的发生发展起重要作用,并且受DNMT1的表达影响。