论文部分内容阅读
本研究以烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)和近缘种棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)为试验材料,对烟夜蛾和棉铃虫凝集素的理化特性和7个凝集素基因表达的发育特性和组织特异性进行了对比研究。初步明确了烟夜蛾血淋巴凝集素的凝集活性,烟夜蛾凝集素的理化性质、棉铃虫凝集素活性及理化性质,以及7个凝集素基因在烟夜蛾与棉铃虫不同发育期和组织中的表达特性。取得以下研究结果: 一、烟夜蛾血淋巴凝集素活性 利用血凝法检测烟夜蛾Helicoverpa assulta血淋巴对红细胞的凝集活性和不同发育期凝集素水平,同时选取13种糖进行凝集素糖抑制反应,以明确该凝集素与烟夜蛾发育的关系和糖结合特性。研究结果表明,在烟夜蛾的不同发育期均检测有凝集素,但各龄幼虫及不同日龄蛹的凝集活性存在明显差异,雌蛹凝集素水平高于同日龄的雄蛹,表明凝集素与发育期、虫龄及蜕皮过程有关,且与性别相关。烟夜蛾蛹血淋巴凝集素活性与近缘种棉铃虫H.armigera的相类似,均被D-半乳糖、L-鼠李糖、麦芽糖、乳糖明显抑制;D-葡萄糖、D-果糖、L-岩藻糖和蔗糖等也有抑制作用,但抑制程度不同;L-阿拉伯糖与棉铃虫凝集索的专一性结合更强:N-乙酰葡萄糖胺和L-山梨糖只对棉铃虫凝集素有抑制作用,而对烟夜蛾凝集素无抑制作用,说明这2个近缘种的凝集素不完全相同。 二、烟夜蛾凝集素的理化性质 利用鸭红血细胞检测反复冻融、加热、EDTA、金属离子、胰蛋白酶以及酚氧化酶对烟夜蛾H.assulta血淋巴中凝集素凝集活性的影响。结果表明:反复冻融对凝集素的活性没有影响。但是,随处理温度的升高或持续时间的延长,其凝集活性下降,在60℃处理15 min后凝集活性完全丧失,说明烟夜蛾血淋巴凝集素的热稳定性较差。10 mmol/L EDTA能显著抑制烟夜蛾凝集素的凝集活性,加入Ca2+能使凝集活性恢复,说明烟夜蛾凝集素是一种C型凝集素。凝集素对经胰蛋白酶修饰后的鸭红血细胞的凝集活性明显增强。血淋巴中酚氧化酶的存在不会对烟夜蛾凝集素的凝集活性产生影响。 三、棉铃虫血淋巴凝集素活性 利用血凝法检测棉铃虫H.armigera血淋巴不同发育期凝集素水平,同时选取13种糖进行凝集素糖抑制反应,以明确该凝集素与棉铃虫发育的关系和糖结合特性。研究结果表明,在棉铃虫的不同发育期均检测有凝集素,相比而言,卵和成虫体内的凝集素水平较低,而幼虫血淋巴中凝集素活性最高,高龄幼虫的凝集活性明显高于低龄幼虫,同一虫龄的幼虫所含凝集素水平差异显著。不同日龄蛹的凝集活性也存在较大差异。此外,雌性个体凝集素水平高于同龄的雄性个体。由此表明,凝集素与棉铃虫发育期、幼虫虫龄、蛹的不同日龄及蜕皮过程有关,且与性别相关。棉铃虫幼虫和蛹血淋巴凝集素活性均被麦芽糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、乳糖、D-半乳糖明显抑制:D-葡萄糖、蔗糖、甘露糖、L-山梨糖等也有抑制作用,但抑制程度不同;D-果糖和N-乙酰葡萄糖胺只对棉铃虫蛹凝集素有抑制作用,而对棉铃虫幼虫凝集素无抑制作用,说明幼虫和蛹的凝集素种类不完全相同。 四、烟夜蛾与棉铃虫二近缘种凝集素基因时空表达对比研究 首先分别选取烟夜蛾和棉铃虫的5龄幼虫,预蛹,不同日龄的蛹,采用RT-PCR法初步分析了2种血细胞凝集素其因ctlh1和ctlh2,以及5种脂肪体凝集素基因ctlf3、ctlf4、ctlf5、ctlf6和ctlf8等7个凝集素基因在两个近缘种不同发育期的表达。在烟夜蛾中发现与棉铃虫相似的7个凝集素基因mRNA的表达。这7个凝集素基因无论在烟夜蛾还是在棉铃虫的不同发育期表达都具有显著差异。同一种基因在两个近缘种之间的表达也存在差异。此外,通过选取烟夜蛾和棉铃虫的脂肪体和血细胞,采用RT-PCR法分析7个凝集素基因在不同组织中的表达情况。结果表明,血细胞凝集素基因ctlh1除在烟夜蛾的血细胞中表达,还在脂肪体表达,组织表达的特异性不强。ctlh2却只在脂肪体表达。脂肪体凝集素基因仅ctlf3和ctl4在烟夜蛾和棉铃虫的脂肪体中表达,具有显著的组织表达特异性;ctlf8只在烟夜蛾脂肪体内特异性表达,但在棉铃虫两个组织中均表达;ctlf5在烟夜蛾脂肪体的表达量显著高于在血细胞中的表达,与此相反,该基因在棉铃虫血细胞中的表达量明显高于在脂肪体中的表达;ctlf6在两种昆虫的脂肪体和血细胞中均有表达。综合以上结果说明7个凝集素基因表达的组织特异性并不明显。