人表皮生长因子(human epidermal growth factor，hEGF)发现于1962年，是一种由53个氨基酸残基组成的单体多肽。已证实hEGF是一种关键性的创伤愈合因子，通过与其受体的结合，它能对上皮细胞和间质细胞产生很强的致分裂作用；能促进皮肤、角膜、肺和气管上皮组织等的增殖和分化；对表皮损伤和溃疡具有良好修复功能；临床上对肠、胃、肝等器官表面损伤的修复和再生也有显著疗效。总之，hEGF在医疗、美容护肤等方面有着广泛的应用前景。　　 但是由于其自身半衰期较短等不利因素，至今尚未得到广泛的使用，利用分子手段将它进行改造已成为必然。针对EGF的三维结构已比较清楚但结构和功能之间的关系并不清楚而且EGF分子本身很小不利于改组的情况，本研究采用易错PCR和StEP联合的方法将hEGF和pEGF(pig EGF猪表皮生长因子)的DNA进行分子定向进化。通过多次尝试，探索了简便、有效、优化的EGF体外定向进化的技术路线，构建了定向进化文库，用SSCP初步检测文库突变率可以达到其它大分子改组的水平。然后将突变文库构建成噬菌体展示文库，通过活细胞噬菌体展示、ELISA和MTT的方法筛选到活性增强的突变体E40V，为EGF体外定向进化提供可借鉴经验。通过测序我们发现了其突变为40Glu→Val，为了解这一突变引起的二级结构变化，对E40V和hEGF进行了圆二色谱的检测，并分析了这些变化对EGF活性增强的贡献，为了解EGF结构与功能之间联系打开新的视角。　　 此外，本研究构建了pET32a(+)-E40V重组质粒，以本实验室构建保存的pET32a(+)-hEGF为对照，用BL21为宿主菌进行融合表达。通过表达条件的优化最终确定在37℃，菌液初始OD600=0.5，IPTG0.5mmol/L，诱导时间6小时的条件下EGF得到最高的溶解性表达，而且使用金属螯合亲和层析纯化后结果表明，E40V的溶解性表达优于hEGF，为E40V的最终应用打下基础。