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细胞膜表面含糖链的唾液酸(Sialic acid，SA)是流感病毒的受体。唾液酸属于九碳糖分子家族，是构成细胞表面糖缀合物的组成成分，通常位于细胞表面糖蛋白、糖脂分子或其他多糖中糖链的最外侧加帽位置，携带负电荷，对于细胞与细胞之间的识别及细胞和细胞外基质的相互作用有重要影响。唾液酸是通过其第二位碳原子以α-2，3或α-2，6糖苷键连接于糖链末端的半乳糖基或己糖上，半乳糖Galactoside简称为Gal。这种不同的连接形式是在唾液酸糖基转移酶的催化作用下完成的。介导唾液酸以α-2，6糖苷键连接到半乳糖上的是ST6Gal转移酶，介导唾液酸以α-2，3糖苷键连接到半乳糖上的是ST3Gal转移酶。 研究发现，哺乳动物细胞既表达SAα2，3Gal，又表达SAα2，6Gal。禽流感病毒通过其表面的血凝素（HA）与宿主细胞表面的唾液酸寡糖受体相结合侵染宿主细胞，大多数禽流感病毒倾向于识别SAα2，3Gal受体，而人流感病毒则倾向于识别SAα2，6Gal的受体，猪流感病毒则对两者皆有结合能力。但哺乳动物细胞膜上唾液酸α-2，3-半乳糖受体丰度偏低，导致低致病性禽流感病毒在这种细胞中的培养滴度低，严重影响了传代细胞代替鸡胚生产低致病性禽流感病毒疫苗工业的进程。国外学者已将人流感受体组分2，6连接基因ST6GALⅠ整合进MDCK细胞构建成稳定表达细胞系，用以研究人流感病毒对2，6连接性受体的亲和能力。国内的步志高等也构建了适合高致病性禽流感病毒生长的重组MDCK细胞，而低致病性的禽流感病毒的收获滴度却较低，所以筛选能有效提升低致病性禽流感病毒培养滴度的稳定表达鸡ST3GALⅠ基因的MDCK细胞株尤为重要。 鉴与此，本研究对鸡ST3GAL转移酶基因进行了优化，方法是克隆鸡ST3GALⅠ基因并将其插入真核表达质粒pIRES中，构建重组质粒pIRES-ST3GALⅠ，通过PCR扩增，限制性酶切和DNA序列分析鉴定目的基因插入大小及方向正确，成功构建了pIRES-ST3GALⅠ真核表达载体。利用真核表达载体pIRES和重组的表达载体分别转化入大肠杆菌DH5α中用不同浓度的IPTG诱导后，发现不同浓度的IPTG诱导的目的蛋白产量之间没有明显的差异，低至0.2~1.2 mmol/L IPTG也可诱导大量目的蛋白产生。SDS-PAGE显示目的蛋白得到了表达。鉴定正确的真核表达载体转染MDCK细胞，用G418抗性筛选稳定表达的重组细胞R-MDCK。PCR及RT-PCR技术鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将不同H9亚型禽流感病毒毒株按相同滴度接种R-MDCK细胞和对照组MDCK细胞，通过HA试验和TCID50试验，检测不同H9亚型禽流感病毒毒株在R-MDCK细胞上的增殖效果。结果4株H9亚型禽流感病毒毒株在R-MDCK细胞HA和TCID50结果均明显高于对照组MDCK细胞。ST3GALⅠ基因在第12代R-MDCK细胞中仍能稳定表达，R-MDCK细胞可有效提升H9亚型低致病性禽流感病毒培养的滴度，可以替代鸡胚用于H9亚型低致病性禽流感病毒的生产。