目的口腔颌面部损伤可导致复杂的软、硬组织缺损,包括血管、皮肤、神经、骨、牙齿等,严重影响患者的生活质量。外泌体的无细胞疗法具有促进组织再生的潜能,并在一定程度上可以实现口腔及颌面部组织的修复和再生。但外泌体存在半衰期短、清除速度快等问题。本实验将分离纯化的外泌体包封在聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶中,研究所制备的材料对皮肤缺损组织修复和再生能力的影响。方法采用超速差速离心法分离并纯化来源于人脐带间充质干细胞的外泌体。检测外泌体的形态、粒径、表面标志性蛋白及人脐静脉内皮细胞对外泌体的摄取能力。制备聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶。检测水凝胶的生物相容性。将其与外泌体直接混合,制备包封外泌体的聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶,通过傅里叶红外光谱检测、扫描电镜及动态激光散射检测包封外泌体后的水凝胶,及体外缓释性能。采用大鼠建立糖尿病模型,于其背部做直径为15mm的圆形缺损,随机分4组处理:Cont组为空白对照组注射PBS、NH组为注射聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶、exo组为注射外泌体、exo@H为注射包封外泌体的聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶,体外实验分别进行细胞增殖、迁移、血管形成实验,体内分别进行缺损部位大体观察、组织学观察及相关蛋白表达的免疫印迹分析。结果透射电镜结果表明经分离纯化的外泌体形态接近球状,粒径分析直径介于40-150nm,表达肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、染色质修饰蛋白4B（CHMP4B）、溶酶体相关膜蛋白-3（CD63）。Exo@H的吸收峰比其他基团更强,具有更多的活性官能团,exo@H是由平均尺寸为400nm的纳米粒子组成的。傅里叶红外光谱检测结果显示,这些基团的波长没有差异,但是exo@H的吸收峰比其他基团更强,表明exo@H具有更多的活性官能团。体外蛋白质印迹法测定包裹在NH中的外泌体可以持续释放1-2周。Exo@H组对HUVECs的增殖、迁移和血管生成优于Cont、NH、exo组（P<0.05）,exo@H组优于exo组（P<0.05）;exo和exo@H组处理的伤口中,与NH组相比,伤口大小显著减小;在术后第6、12和18天,exo@H组的伤口区域明显小于Cont、NH、exo组。术后第18天,exo@H组伤口几乎修复到闭合状态,而exo组伤口仍可见。组织学结果表明,与exo和exo@H组相比,Cont组和NH组不能形成较完整的上皮组织;exo组和exo@H组已经完成了再上皮化的过程,exo@H组的上皮比exo组更光滑、规则,伤口周围开始形成毛囊;Cont组和NH组仅出现少量胶原纤维束,且排列疏松、紊乱;与Cont和NH组相比,exo和exo@H组的伤口处有较多的胶原纤维,且其排列有序,exo@H组胶原纤维更粗壮。Western blotting实验结果显示,exo@H组中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、B类Ⅰ型清道夫受体蛋白（SR-B1）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板-内皮细胞粘附因子（CD31）表达明显高于exo组、NH组（P<0.05）。总ERK1/2的表达在各组之间没有差异。相比于NH组,exo和exo@H两组中p-ERK1/2的表达水平明显更高,并且exo@H组比exo组能更有效地促进ERK1/2的磷酸化（P<0.01）。结论1、聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶包裹外泌体呈现出较好的生物相容性,能够促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和血管生成;2、聚乙烯醇/海藻酸钠纳米水凝胶包裹外泌体能够通过VEGF/ERK1/2通路促进新生血管的形成,从而加速糖尿病大鼠皮肤缺损的愈合。