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磷脂酶A1（PLA1,EC3.1.1.32）是一种特异性水解磷脂sn-1酰基键生成自由脂肪酸和溶血磷脂的水解酶。传统的PLA1主要来自于蛇毒和动物胰脏，由于分离纯化和生产困难，因此远远不能满足工业化生产的需求。而对于微生物来源的酶具有操作简单、生产周期短以及可大规模工业化生产等优势，因此具有很大的应用价值。但目前发现的产PLA1的微生物并不多，关于PLA1基因异源表达的研究更少，且所产酶活力普遍较低。所以本研究的主要内容为微生物来源的PLA1基因的异源表达，具体研究内容及结果如下：(1)对PLA1的酶活测定方法进行研究，详细比较了硼砂卵黄平板法、碱滴定法和分光光度法三种酶活力测定方法，最后选定以硼砂卵黄平板法为PLA1定性和酶活力半定量的方法，以碱滴定法作为PLA1酶活力定量的方法。(2)以杨氏柠檬酸杆菌Citrobacter youngae（C. youngae）CICC No.21596染色体基因组为模板PCR扩增出编码PLA1的基因pla1，构建大肠杆菌重组菌。经IPTG诱导后，重组菌可在硼砂卵黄平板上检测到明显的PLA1活性，经SDS-PAGE电泳检测发现重组蛋白的相对分子质量约为33kDa。对重组菌在摇瓶水平的发酵诱导条件进行初步优化，得到较优诱导条件为：诱导剂加入时机为OD600为0.6，诱导温度37℃，IPTG添加终浓度0.4mmol·L-1，诱导时间8h。此时大肠杆菌重组菌产PLA1水平达到最高，通过碱滴定法测得最高酶活力为（5.6±0.2）U·mL-1。(3)利用Ni-螯合柱对重组酶进行分离纯化，对纯化后的PLA1酶学性质研究显示，该重组酶的最适反应温度为50℃，在25~60℃温度范围内重组酶具有良好的热稳定性；最适反应pH为7.5，在pH6~8范围内重组酶具有良好的pH稳定性。(4)以杨氏柠檬酸杆菌染色体基因组为模板分别PCR扩增得到编码PLA1的基因pla1，以pPIC9K和pHY-p43为载体构建表达质粒并分别转化毕赤酵母GS115和枯草芽孢杆菌WB600，成功获得了毕赤酵母重组菌和枯草芽孢杆菌重组菌。对两种重组菌的酶活力进行测定比较，发现毕赤酵母重组菌的PLA1活力要明显高于重组枯草芽孢杆菌。(5)对毕赤酵母重组菌进行发酵条件优化，得到在摇瓶水平毕赤酵母重组菌最佳发酵表达条件：接种量70mL/50mL发酵培养基、甲醇添加量0.4%、发酵产酶pH6.0、诱导时间102h，经发酵优化后最高酶活力可达3.73U·mL-1。