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杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)一般都与肿瘤的抑制基因有关，前列腺癌等癌症患者的染色体8p21～22和10q23～24区域是LOH高发区域，提示着这个区域存在大量肿瘤抑制基因。LZTS2基因位于人类染色体10q24.3亚区，经研究发现LZTS2蛋白在人体多种组织当中均有表达，但以正常的前列腺和睾丸组织中表达最高腺和睾丸中高表达。有研究表明在LNCaP，TRSUPr1，PC3（前列腺癌细胞），U2Os（骨肉瘤细胞），HEK-293T细胞，AT6.2（鼠癌细胞）和Rat-1（鼠正常成纤维细胞）等细胞系中过表达LZTS2可以明显抑制细胞的增殖和克隆形成能力，提示着LZTS2是发挥抑制细胞生长的另一个抑癌基因，但其发挥抑制细胞生长的机制尚不清楚。
β-catenin是个多功能的蛋白。首先，他能与E-cadherin胞内端结合从而调解细胞与细胞之间的黏着，而且β-catenin能通过α-catenin与肌动蛋白网架结合，在细胞的分化和增殖中起着重要的作用，不仅如此，β-catenin还是Wnt/Wingless信号通路的主要成员。在没有wnt信号刺激时β-catenin位于胞浆，而任何的游离的β-catenin都可以与APC、GSK3β和Axin组成的高分子降解复合体所降解。核内的β-catenin则可以与T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)结合并且能激活众多Wnt的下游靶基，可以说在没有wnt信号刺激时β-catenin的降解是β-catenin代谢的主要部分。在很多肿瘤组织中β-catenin通过其降解复合体来发挥功能的。
GSK3β能磷酸化β-catenin，磷酸化的β-catenin可以被β-TrCP所识别，进入泛素化降解途径迅速降解。使GSK3β失活或者使用Akt抑制GSK3β都能让β-catenin在胞浆中稳定下来，使β-catenin的入核增加，进而激活了经典的Wnt信号通路。
目前LZTS2在人类肿瘤组织中的研究未见报道，对LZTS2作用机制的研究仅限定在他与β-catenin在细胞浆中的共定位但这是否为LZTS2作用的唯一机制尚待探讨。
我们选取了正常的肺组织和非小细胞肺癌病例，通过免疫组化来观察并对比正常肺癌组织与非小细胞肺癌组织中LZTS2的表达水平以及LZTS2跟各种临床病理因素的关系。在肺癌细胞系中，我们选择了LZTS2高低不同表达的两种肺癌细胞系A549和H1299，通过双向调控LZTS2的表达，观察LZTS2对β-catenin的表达、定位以及Wnt信号通路活性的影响，从而发现LZTS2调控Wnt活性及对肺癌细胞增殖的新机制。
材料与方法
1、组织来源
选取89例原发性NSCLC，标本来自2001年到2004年在中国医科大学附属第一医院实行手术的病人，患者术前均未接受放化疗。组织经10％中性福尔马林固定、石蜡包埋。根据WHO2003标准进行诊断后，按国际抗癌联盟(UICC，2007)的肺癌P-TNM分期标准:I(n=40)，Ⅱ+Ⅲ(n=49)，男性46例，女性43例，年龄33～72岁，平均年龄60岁。
2、细胞系及质粒
肺癌细胞系A549，H1299（购自ATCC），均用含10％热灭活新鲜小牛血清的RPMI1640(Gibco，USA)、100U/ml的青霉素、100U/ml的链霉素的培养基，在37℃、5％ CO2的条件下培养。pCMV6空质粒和pCMV6-LZTS2质粒购自ORIGENE，On-TrgetPlus SMARTpool siRNA for LZTS2与 On-TrgetPlus siControl(D-001810-01)购自Genepharma。转染前24小时将细胞按50％密度接种于24孔板，采用Attractene转染试剂进行转染，转染后48小时使用Western blot检测干扰效率。
3、主要试剂
兔羊抗人LZTS2多克隆抗体(组化:1∶100，Western blot:1(:)∶1000，Sigma，CA，USA)β-catenin(1∶1000)(BD), cyclinD1(1∶1000), c-Myc(1∶400), phospho-Akt(1∶500),Akt(1∶500), phospho-GSK3β(Ser9)(1∶500)(Cell signaling technology, Boston, MA,USA),β-actin(1∶500), phosphoβ-catenin(1∶500;Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz，CA)。
4、免疫组织化学染色
将石蜡组织块切成4μm厚切片，脱蜡，脱水，按S-P法和抗体说明操作。抗LZTS2的多克隆抗体(1∶150，Sigma)，采用Elivision试剂盒(MaiXin，China)。以PBS代替一抗作为空白对照。结果判定: LZTS2免疫组化阳性信号定位于细胞核。我们将1-25％的细胞核着色记为1分，26-50％记为2分，51-75％记为3分，76-100％记为4分。同时根据染色强度:无染色记为0分，黄色颗粒记为1分，棕褐色颗粒记为2分。着色细胞数得分乘以着色强度得分为LZTS2得分。我们将得分0-4分记做LZTS2阴性，得分5-8分记做LZTS2阳性。
5、 Western Blot
用Western Blot法检测LZTS2对其他蛋白的影响。
6、MTT、集落形成实验和PI单染
用MTT和集落形成实验观察LZTS2对细胞增殖的影响，PI单染则检测LZTS2对细胞周期的影响。
7、荧光素酶报告基因
检测LZTS2对肺癌增殖起关键作用的Topflash（TCF4启动子荧光素酶报告基因的活性）的影响。
8、蛋白质免疫共沉淀
检测LZTS2与β-catenin蛋白结合情况。
9、数据分析
采用SPSS16.0统计分析软件，对LZTS2表达和临床病理因素的关系用卡方检验;其他实验结果采用t检验进行数据分析，用mean+SD表示，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001为差异有意义。
实验结果
1、免疫组化发现:与正常肺组织相比，LZTS2在非小细胞肺癌组织中低表达，其阳性表达与分型相关，且与肿瘤大小及淋巴结转移呈负相关。
2、LZTS2抑制肺癌细胞的增殖。
3、LZTS2通过调节β-catenin蛋白降解途径，抑制经典Wnt信号通路活性。
4、LZTS2通过Akt/GSK3β途径促进β-catenin的降解。
结论：
1、与正常肺组织相比，LZTS2在非小细胞肺癌组织中普遍低表达，其阳性表达与肿瘤大小及淋巴结转移负相关。
2、LZTS2非小细胞肺癌细胞系中通过Akt/GSK3β途径促进β-catenin的降解，从而抑制了经典的Wnt信号通路和细胞的增殖。