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目的用pEGFP-N2/XPD重组质粒稳定转染人肝癌细胞SMMC-7721,检测转染前后对p8/TTDA表达情况的影响,探讨它们之间的相互作用,并检测其下游基因p53及c-myc等的表达;观察转染前后人肝癌细胞SMMC-7721所发生的生物学变化。方法用重组质粒pEGFP-N2/XPD、空载质粒pEGFP-N2分别通过脂染法转染SMMC-7721细胞。转染后用选择培养基(含G-418 800μg/ml),经有限稀释法,获得稳定转染重组质粒pEGFP-N2/XPD的SMMC-7721细胞(SMMC-7721-pEGFP-N2/XPD)及稳定转染空载质粒pEGFP-N2的SMMC-7721细胞(SMMC-7721- pEGFP-N2),并用具有相同遗传背景和代数的脂质体转染对照组和无转染空白对照组作为对照。用RT-PCR、Western blot法检测转染前后p8、XPD、p53、c-myc表达量的变化,MTT法观察细胞增殖活力。结果1. RT-PCR检测SMMC-7721-pEGFP-N2/XPD组、SMMC-7721- pEGFP-N2组、脂质体转染对照组和无转染空白对照组中p8/TTDA mRNA相对表达量分别为:0.624±0.055、0.179±0.084、0.159±0.093、0.156±0.060。四组细胞中XPDmRNA相对表达量为:0.972±0.078、0.295±0.041、0.219±0.072、0.280±0.081。p8 mRNA在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的,稳定转染野生型XPD后, p8mRNA和XPD mRNA表达量明显增高(P<0.001)。2. RT-PCR检测四组细胞中p53 mRNA相对表达量为:0.829±0.024、0.567±0.018、0.566±0.052、0.516±0.064;四组细胞中c-myc mRNA相对表达量为:0.212±0.027、0.862±0.013、0.887±0.067、0.816±0.069。稳定转染重组质粒细胞组p53 mRNA表达量亦明显增高(P<0.05),c-myc mRNA表达量则明显下降(P<0.001)。3. Western blot检测中p8蛋白在四组细胞中的相对表达量分别为:0.516±0.093、0.257±0.086、0.287±0.044、0.252±0.084;XPD蛋白相对表达量分别为:0.606±0.076、0.264±0.083、0.223±0.086、0.276±0.053;p53蛋白相对表达量分别为: 0.894±0.046、0.455±0.038、0.443±0.051、0.405±0.072; c-myc蛋白相对表达量为:0.233±0.040、0.529±0.066、0.500±0.052、0.521±0.062。p8蛋白在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的。稳定转染野生型XPD后, p8蛋白、XPD蛋白、p53蛋白表达量明显增高(P<0.05),c-myc蛋白表达量则明显下降(P<0.001),差异有统计学意义。4. MTT检测示SMMC-7721-pEGFP-N2/XPD组与SMMC-7721- pEGFP-N2组、脂质体转染对照组和无转染空白对照组相比,稳定转染重组质粒细胞组细胞增殖率明显减弱(P<0.001)。结论人剪切修复基因XPD可调控p8/TTDA基因的表达。野生型XPD稳定转染SMMC-7721细胞后,p8 mRNA和蛋白表达量明显增高。野生型XPD转染后亦可上调p53基因及蛋白表达,下调c-myc基因及蛋白表达,从而在分子途径上抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡。