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第一部分：Twist和VEGF在非小细胞肺癌中的表达及临床意义目的：探讨非小细胞肺癌中Twist和VEGF蛋白表达与临床参数的关系及其临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测Twist和VEGF蛋白在61例NSCLC及癌旁组织中的表达情况,选取13例炎性假瘤作为良性疾病对照。结果：Twist和VEGF在NSCLC组织中的阳性表达率分别为73.8%和77.0%,明显高于癌旁组织和肺良性病变组织(P< 0.05)。Twist和VEGF表达均与患者年龄、性别、病理类型、分化程度、临床分期无关(P>0.05),与淋巴结转移相关(P<0.05)。Twist和VEGF在NSCLC中表达呈正相关(r=0.738,P<0.01)。NSCLC患者Twist阳性表达者与阴性表达者的1年无病生存(disease free survival,DFS)率分别为73.3%和87.5%,差异无统计学意义(P>0.05); VEGF阳性表达者与阴性表达者的1年DFS率分别为74.5%和85.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Twist和VEGF高表达的NSCLC患者更易发生淋巴结转移,两者可能在NSCLC侵袭转移过程中起协同作用。Twist和VEGF阳性表达患者1年DFS低于阴性表达者,但差异无统计学意义,这可能与病例数偏少有关。第二部分：shRNA下调Twist表达对A549细胞生物学行为和放疗敏感性的影响及机制研究目的：探讨shRNA下调Twist表达对A549细胞生物学行为和放疗敏感性的影响及其可能作用机制。方法：构建表达针对Twist mRNA的shRNA和不针对任何人mRNA的阴性对照shRNA病毒颗粒,分别转染A549细胞。Western blot检测A549细胞空白组、阴性对照组、Twist沉默组三组细胞Twist蛋白表达情况。MTT法检测三组细胞增殖情况。克隆形成实验检测三组细胞放疗后增殖情况。流式细胞术检测三组细胞放疗前后的周期分布和凋亡情况。Transwell小室检测三组细胞放疗后体外迁移、侵袭能力。Western blot检测三组细胞放疗后p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果：Twist沉默组较A549细胞空白组、阴性对照组Twist蛋白表达显著降低。单纯下调Twist表达对A549细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡无明显影响P>0.05)。Twist沉默组较阴性对照组放疗增敏比为1.31. Twist沉默组放疗后G0/G1期细胞百分比(82.00%±2.72%)较空白组(63.66%±±2.47%)、阴性对照组(69.43%±±0.32%)增加,差异有统计学意义(P<0.05); Twist沉默组放疗后凋亡细胞百分比(13.88%±±0.16%)较空白组(6.31%±0.57%)、阴性对照组(7.37%±±0.67%)增加,差异有统计学意义(P<0.05)。下调Twist表达可以抑制A549细胞放疗后迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。放疗后Twist沉默组较空白组、阴性对照组p53、p21、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论：Twist-shRNA能够显著下调A549细胞Twist表达。单纯下调Twist表达对A549细胞增殖、周期、凋亡无明显影响。下调Twist表达可以增加A549细胞放疗敏感性,降低其放疗后迁移侵袭能力。下调Twist表达增加A549细胞放疗后G0/G1期阻滞和凋亡。下调Twist表达对A549细胞放疗后细胞周期和凋亡的影响可能与下调Twist介导的p53蛋白表达增加进而调控p53靶基因的转录活性有关。