组蛋白乙酰转移酶MoHat1及五个bZIP转录因子在稻瘟病菌中的功能研究

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由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是水稻上的三大病害之一,严重威胁着全球水稻的生产安全。因此稻瘟病的防治始终是水稻生产上的一个重要课题。由于该病原菌小种的易变性,仅依靠选育和利用抗病优质良种不能达到有效防治该病害的目的。因此了解并掌握其生长发育及致病过程中的分子机制是控制该病原菌的一个重要前提。随着稻瘟病菌全基因组序列的公布,运用分子生物学方法对致病相关基因的功能研究也越来越方便,这就为寻找新的杀菌剂作用靶标提供了理论依据。染色质组装和重塑在真核细胞DNA损伤修复中起重要作用。染色质和染色体是细胞核中同种物质的不同形态,由基本组成单位核小体经螺旋、盘绕、压缩而成。核小体的中部是由4种组蛋白(H2A.H2B.H3.H4)各两个分子构成的八聚体组成。组蛋白组装到核小体上是转录,复制和调控修复DNA损伤的过程中的重要一步。组蛋白乙酰化在染色质结构形成初期起着重要作用。细胞质中新合成的组蛋白首先发生乙酰化,然后在组装到染色质中。在酿酒酵母(Saccharomycws cesrevisiae)中,组蛋白乙酰转移酶Hatl的缺失使染色质结构端粒沉默存在缺陷,同时对DNA损伤剂(如MMS)高度敏感。在白色念珠菌(Candida albicans)中,组蛋白乙酰转移酶Hatl的缺失使其形态发生改变,由类酵母状转变成假菌丝状,对DNA损伤剂(MMS.EMS.4-NQO)及紫外线高度敏感,在修复DNA损伤过程中起着重要作用。本文第一章从稻瘟病菌全基因组数据库中鉴定了一个与酿酒酵母(S.cerevisiae)组蛋白乙酰转移酶Hat1同源的蛋白MoHatl,其编码基因MOHAT1在侵染8h阶段上调表达;MoHAT1基因缺失突变体生长速率显著降低,产孢量显著下降。用突变体孢子液接种水稻和大麦叶片,发现其致病力均显著下降。对DNA损伤剂MMS和杀真菌剂CASP高度敏感。通过显微镜观察发现,突变体侵染菌丝的扩展受到抑制。而MoHAT1-GFP互补菌株可以恢复以上表型,通过荧光显微镜观察发现MoHat1主要定位在细胞核中。通过对菌丝体进行CFW染色,发现突变体菌丝中几丁质的合成受到影响。通过上述结果表明,MoHat1参与调控稻瘟病菌的生长发育、DNA损伤的修复及致病性。bZIP (basic leucine zipper, bZIP)转录因子是根据他的碱性亮氨酸拉链结构域命名的一类蛋白,广泛存在于微生物、植物、昆虫及动物中。bZIP蛋白不但是转录因子中还是阻抑蛋白中最保守且最大的蛋白类型之一。在植物中,bZIP蛋白不但与光形态发生、种子中贮藏基因的表达、控制器官建成有紧密关系,还参与其他多种生物学过程,包括花发育、植物生长、病菌防御、损伤、光信号以及对各种环境胁迫的应答。本文第二章主要研究了五个bZIP转录因子MoBZIP1、MoBZIP2、MoBZIP3、 MoBZIP12、MoMEAB。发现MoBZIP1、MoBZIP2、MoBZIP3的缺失导致产孢量上升;MoBZIP12、MoMEAB的缺失使稻瘟病菌的产孢量下降;MoBZIP12参与调控分生孢子的形态;MoMEAB参与调控稻瘟病菌对氮的利用。这五个基因都不影响稻瘟病菌的致病性。
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