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目的:胸腺上皮肿瘤多发生于前纵隔,具有潜在的侵袭性,其组织学以及生物学特性较繁杂,现手术完整切除是较好治疗方式,但少数病人术后仍复发,为寻求一些参数作为评估胸腺上皮肿瘤预后的参考,本课题选取甲基化特异性聚合酶链反应和免疫组织化学两种试验方式,对胸腺上皮肿瘤中的O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)进行检测,测出其中甲基化和蛋白表达的情况,并评估两种试验方式结果与胸腺上皮肿瘤的相关性,为临床诊治提供依据。方法:1采用甲基特异性聚合酶扩增链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测94例胸腺上皮肿瘤中MGMT基因启动子区甲基化状态。2免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)SP法检测胸腺上皮肿瘤组织中MGMT蛋白表达情况。3病例随访及查阅病历了解患者信息及预后状况。4应用统计软件SPSS21.0对实验数据进行分析。结果:1 MGMT甲基化与蛋白表达缺失35例胸腺上皮肿瘤标本检测为MGMT表达降低,其中25例可测到MGMT甲基化(71.4%),59例肿瘤标本检测为MGMT正常表达,其中17例可测到MGMT甲基化(28.8%)。这说明MGMT甲基化与蛋白缺失之间相关(P<0.05)。2 WHO分型、MGMT甲基化和蛋白表达缺失胸腺上皮肿瘤组织中,胸腺癌MGMT启动子区甲基化率为71.4%(20/28)明显高于胸腺瘤33.3%(22/66),差异有统计学意义(P<0.05);MGMT蛋白主要表达于细胞核或细胞质中,胸腺癌中蛋白表达降低发生率为78.6%(22/28)明显高于胸腺瘤19.7%(13/66),差异有统计学意义(P<0.05)。MGMT甲基化与胸腺瘤中组织学亚型无明显相关:A型6例,1例发生甲基化(16.7%),AB型16例,6例发生甲基化(37.5%),18例B1型,4例发生甲基化(22.2%),B2型16例,7例发生甲基化(43.8%),B3型10例,4例发生甲基化(40.0%)。MGMT蛋白缺失和胸腺瘤组织学亚型之间无明显相关。A型6例,0例发生蛋白表达缺失(0%),AB型16例,3例发生蛋白表达缺失(18.8%),18例B1型,3例发生蛋白表达缺失(16.7%),B2型16例,3例发生蛋白表达缺失(18.8%),B3型10例,3例发生蛋白表达缺失(30.0%)。3 Masaoka分期、MGMT甲基化和蛋白表达缺失胸腺上皮肿瘤中发生甲基化,分别为:Ⅰ期13.3%(4/30),Ⅱ期36.8%(7/19),Ⅲ期50%(10/20),Ⅳ期84.0%(21/25)。中晚期肿瘤(Ⅲ+Ⅳ期)MGMT甲基化发生率高于早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期),其中中晚期肿瘤45例,31例发生甲基化(68.9%),早期肿瘤49例,11例发生甲基化(22.4%),两组数据差异有统计学意义,P<0.05。胸腺瘤中甲基化发生率,分别为:Ⅰ期10.7%(3/28),Ⅱ期45.5%(5/11),Ⅲ期35.7%(5/14),Ⅳ期69.2%(9/13)。中晚期肿瘤(Ⅲ+Ⅳ期)甲基化发生率与早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期)甲基化发生率有差异(14/27,51.9%vs 8/39,20.5%,P<0.05)。胸腺上皮肿瘤中发生蛋白表达缺失,分别为:Ⅰ期13.3%(4/30),Ⅱ期42.1%(8/19),Ⅲ期40.0%(8/20),Ⅳ期60.0%(15/25)。中晚期肿瘤(Ⅲ+Ⅳ期)MGMT蛋白表达缺失发生率明显高于早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期),其中中晚期肿瘤45例,23例发生蛋白缺失(51.1%),早期肿瘤49例,12例发生蛋白缺失(24.4%)(P<0.05)。胸腺瘤中蛋白表达缺失发生率,分别为:Ⅰ期7.1%(2/28),Ⅱ期27.3%(3/11),Ⅲ期35.7%(5/14),Ⅳ期23.0%(3/13)。中晚期肿瘤中(Ⅲ+Ⅳ期)MGMT蛋白表达缺失发生率与早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期)无明显差异(8/27,29.6%vs5/39,12.8%,P>0.05)。4伴发重症肌无力(MG)伴发MG患者中MGMT启动子区甲基化发生率为60%(12/20),未伴发MG患者中甲基化发生率为40.5%(30/74),伴发MG与MGMT启动子区甲基化统计学无明显差异(12/20,60%vs 30/74,40.5%,P>0.05)。伴发MG患者中MGMT蛋白表达缺失发生率55.0%(11/20),未伴发MG患者中蛋白表达缺失发生率32.4%(24/74),伴发MG与MGMT蛋白表达无明显关联(11/20,55.0%vs 24/74,32.4%,P>0.05),伴发MG与WHO组织学分型无明显关联(P>0.05),20例伴发MG病例中,A型0例(0.0%),AB型0例(0.0%),B1型3例(15.0%),B2型5例(25.0%),B3型3例(15.0%),胸腺癌9例(45.0%)。伴发MG与Masaoka临床分期无明显关联(P>0.05),早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期)7例(35.0%),中晚期肿瘤13例(65.0%)。5总体生存率检测出MGMT甲基化的病例与未检测出甲基化的病例各自的总生存率之间无明显差异(67.6%VS 79.9%,5年生存率;P>0.05)。表现出MGMT表达缺失的病例与表现出MGMT表达正常的病例各自的总生存率之间无明显差异(70.3%VS 78.1%,5年生存率;P>0.05)。WHO组织学分型下,胸腺瘤的病例总生存率明显高于胸腺癌(84.6%vs 54.7%,五年生存率;P<0.05),Masaoka分型下,Ⅰ/Ⅱ期患者术后生存率高于Ⅲ/Ⅳ患者(85.0%vs64.3%,五年生存率;P<0.05)。6多因素分析甲基化、分期以及组织学分型我们的参数包括年龄,性别,组织分型,临床分期以及重症肌无力。只有胸腺癌(P<0.001)和中晚期肿瘤(P<0.05)和MGMT甲基化独立相关。结论:胸腺上皮肿瘤中,胸腺癌的MGMT启动子区甲基化发生率较胸腺瘤高。胸腺上皮肿瘤侵袭性与MGMT启动子区甲基化有明显关联。