生物破乳剂是一种高效、无毒、无污染、可生物降解、安全绿色的生物制剂。高效的生物破乳剂能够提高原油乳状液的脱水率、减少后续原油污水的处理难度，从而减少环境污染、保护人类健康，因此，生物破乳剂替代化学破乳剂具有良好的经济效益和环境效益。通过高效、便捷的破乳菌筛选方法，分离筛选到2株高效破乳菌，其全培养液针对含水80%原油乳状液12h破乳率达85.0%。经过生理生化及16S rDNA基因序列分析，明确一种菌为Serratia marcescens (PRJ-1)，一种为Bacillus mojavensis (PRJ-2)。通过连续传代稳定性实验，证明两株菌株均有良好的破乳遗传稳定性。对PRJ-1菌株进行破乳实验及生物量测定，考察不同环境对破乳菌生长及破乳效率的影响，确定PRJ-1最适培养条件、最适营养条件及最佳破乳条件。采用廉价碳源油泥、车间废弃油、食用废弃油，对PRJ-1进行培养，结果PRJ-1破乳菌在废弃油中生长良好，生长速度快，优于石蜡培养基。全培养液破乳效率更高，脱出水更清澈。对PRJ-1菌体全培养液进行离心，比较全培养液各组分的破乳效率，确定菌体自身及代谢产物均具有较高的破乳能力。通过显微观察和理化分析，确定菌体代谢产物中破乳活性成分为蛋白类物质。通过复配研究，证实了破乳菌PRJ-1具有高效、稳定的破乳活性，优于常规化学破乳剂效果，具有较大的应用价值和广泛的适用范围，充分体现了生物破乳剂的优势，因此，生物破乳剂具有广阔的发展前景，在经济环保方面意义深远。