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目的探讨BDNF-TrkB信号通路在母婴分离大鼠慢性内脏痛中枢敏化中的作用。方法新生SD大鼠出生后第3~21 d,每天固定时间给予3 h母婴分离,且每只幼鼠单独置于独立小隔间中,建立母婴分离大鼠模型。(1)大鼠成年后(8~10W)通过记录其腹肌对结直肠扩张(40和60mmHg压力)的放电反应幅值评估大鼠的内脏痛觉敏感性。选择内脏痛觉敏化的模型大鼠进行实验;(2)鞘内分别给予5、10、20mM浓度的TrkB选择性抑制剂(ANA-12),观察不同浓度ANA-12对母婴分离大鼠和对照大鼠内脏痛觉敏感性的影响;(3)采用Western blot实验检测母婴分离大鼠胸腰段和腰骶段脊髓中BDNF和TrkB受体的表达,观察模型大鼠脊髓中BDNF和TrkB受体的表达;(4)采用实时荧光定量PCR的方法进一步明确胸腰和腰骶段脊髓中TrkB的mRNA表达量;(5)鞘内给予中浓度的ANA-12,观察其对母婴分离大鼠痛觉敏感性抑制作用的起效时间及其药效维持时间;(6)Western blot检测鞘内给予TrkB选择性抑制剂ANA-12前后,脊髓中PKMζ的表达量是否有变化;(7)旷场实验观察高浓度ANA-12对母婴分离大鼠自发运动功能及其情绪的影响。结果(1)母婴分离大鼠内脏痛觉敏感性显著高于对照大鼠(P<0.05);(2)TrkB选择性抑制剂ANA-12可剂量依赖性抑制母婴分离大鼠的痛觉敏感性(P<0.05);(3)Western blot结果显示母婴分离大鼠脊髓胸腰和腰骶节段的BDNF和TrkB受体表达水平显著高于对照大鼠(P<0.05);(4)母婴分离大鼠脊髓胸腰和腰骶节段中TrkB的mRNA表达水平也显著增高(P<0.05);(5)鞘内注射ANA-12可显著抑制母婴分离大鼠的痛觉敏感性,且镇痛效果在给药后30 min左右最强,作用可维持150min左右;(6)母婴分离大鼠鞘内给予TrkB选择性抑制剂ANA-12后,脊髓相应节段中PKMζ的表达量显著低于给药前(P<0.05);(7)旷场实验结果显示高浓度ANA-12对正常大鼠和母婴分离大鼠的自发运动功能无显著影响(P>0.05),而对情绪有一定的影响,提示ANA-12的镇痛作用具有一定选择性。结论新生期母婴分离可导致大鼠成年后出现内脏痛觉敏化,脊髓中BDNF及其TrkB受体在慢性内脏高敏感脊髓中枢敏化中发挥重要作用,而PKMζ可能是其下游信号通路的一个靶点。