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目的:制定贯叶连翘药材及其提取物中主要指标性成分金丝桃素的反相高效液相含量测定方法,从而更有效地控制贯叶连翘药材及其提取物的质量,为贯叶连翘提取物的生产提供科学依据;以金丝桃素提取率及其含量为指标,建立贯叶连翘药材的酶解工艺、溶剂提取工艺、大孔吸附树脂纯化工艺;建立贯叶连翘提取物制备过程中各阶段提取物的HPLC指纹图谱,运用CHROMAP1.5指纹图谱处理软件对提取物HPLC指纹图谱进行处理分析,用以监控贯叶连翘提取物提取纯化各阶段生产工艺及评价贯叶连翘提取物的质量。 方法:(1)建立贯叶连翘药材及其提取物中指标性成分金丝桃素的HPLC含量测定方法,考察了影响含量测定准确性的因素,并进行了系统的方法学考察;(2)以金丝桃素指标,考察不同溶剂对贯叶连翘的提取效果,筛选出最佳提取溶剂,并优化制定出最佳溶剂提取工艺;(3)考察纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、?-葡聚糖酶、复合酶SPE-007A等不同酶及酶的组合对贯叶连翘酶解,并对酶解后药材以乙醇提取,同时与贯叶连翘药材不酶解提取进行比较,按照指标性成分金丝桃素提取效果的优劣,最终筛选出较好的提取方法与酶解效果较优的植物提取用酶与酶的组合,并建立最佳酶的最优酶解工艺;(4)以金丝桃素为指标考察不同类型的大孔吸附树脂对贯叶连翘提取物的纯化效果,并结合大孔吸附树脂的方法纯化贯叶连翘提取物,筛选出最佳大孔吸附树脂,并建立贯叶连翘提取物的最佳大孔吸附树脂纯化方法;(5)分别测定陕西产贯叶连翘药材溶剂直接提取物,酶解后提取物,酶解并纯化后提取物的HPLC指纹图谱,比较酶解前后及纯化前后提取物中主要成分的变化及指标性成分金丝桃素含量的变化情况。 结果:(1)建立了贯叶连翘及其提取物的HPLC含量测定方法,金丝桃素在0.0104～0.208μg(r2=0.9999)范围内具有良好的线性关系,其平均加样回收率为98.9％,RSD为0.54%。结果表明,所建立的测定方法简便,重复性良好。(2)筛选出了提取率高的贯叶连翘提取溶剂-乙醇,并优选了乙醇提取贯叶连翘的最佳提取工艺;考察了纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、?-葡聚糖酶、复合酶SPE-007A等5种酶对贯叶连翘药材的酶解效果,筛选出对贯叶连翘中金丝桃素提取率较高的酶,并优化出了贯叶连翘的最佳酶解工艺。(3)筛选出了对贯叶连翘提取物纯化效果较好的LSA-10型大孔吸附树脂,并系统考察了影响LSA-10纯化贯叶连翘提取物的各因素,最终确立了最佳大孔吸附树脂纯化工艺。(4)分别采集了贯叶连翘药材酶解前后、酶解后大孔树脂纯化贯叶连翘提取物的HPLC色谱图,进行了方法学考察,运用CHROMAP1.5指纹图谱软件对贯叶连翘提取物HPLC色谱图进行处理分析,分别建立了共有模式,并针对贯叶连翘提取物制备过程中三个阶段的工艺分别建立了HPLC指纹图谱样品的识别模式,通过测试各模式指认各组内与组外的不同样品验证所建各模式的指认准确性与相对独立性,以证明提取纯化各阶段工艺的稳定性与可行性,并最终将所建HPLC指纹图谱作为陕西产贯叶连翘提取物的质量评价与提取纯化工艺的监控手段。 结论:所建立的金丝桃素的HPLC含量测定方法,准确、可靠,可用于贯叶连翘药材及其提取物的质量控制;工艺验证实验及各阶段HPLC指纹图谱在线监控表明,最终优选得到的贯叶连翘酶解、乙醇提取及大孔吸附树脂纯化工艺稳定可行;所建立的提取纯化工艺各阶段的HPLC指纹图谱能够对贯叶连翘提取物的生产进行准确监控。