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猪细小病毒(Porcince parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,以母猪发生流产、不孕、产死胎、木乃伊胎及弱仔等为特征。猪圆环病毒2型(PCV-2)为引起猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,并且PCV-2严重破坏猪的免疫系统,使猪的抵抗力下降,易发生混合或继发感染。在实际生产过程中,PPV和PCV-2常混合或继发感染,相互作用,加重疫病的发展,给生猪的繁殖、发展带来了巨大的经济损失。本研究将猪细小病毒JT株(PPV-JT)同步接种PK-15,提取复制型DNA(RF-DNA),将其分段克隆至pUC18载体,最终构建得到PPV全基因组感染性克隆,命名为pPPV-JT,并进行测序分析。结果,PPV-JT株全基因长4941bp,与GenBank中发表的参考PPV毒株的相应基因序列进行比较,NS1基因的同源性为98.2%~99.9%;NS2基因的同源性为97.9%~100%;NS3基因的同源性为98.5%~100%;VP1基因的同源性为98.6%~99.9%;VP2基因的同源性为98.3%~99.8%。结果表明PPV基因具有相对较高的保守性。系统发生分析表明PPV-JT株的NS1基因与PPV China株的亲缘关系最近,NS2基因及NS3基因与PPV BQ株的亲缘关系最近,但结构蛋白VP1基因和VP2基因与NADL-2株的亲缘关系较为密切。系统发生树分析结果表明PPV-JT株可能是一株新的重组PPV。将PPV-JT株与其同源性最高的NADL-2株基因对比发现,NS1蛋白发生了Trp440Leu突变;VP2蛋白发生了Pro304Ser突变。其中VP2蛋白上的突变位于第4个线性化抗原位点上,可能会影响PPV的抗原性和致病性。PPV-JT NS1蛋白的Thr435和Ser473为其磷酸化位点。PPV-JT的VP2蛋白的378、383和436位氨基酸残基序列及两个127bp的重复序列都与NADL-2株一致,推测PPV-JT株为弱毒株。因细小病毒的基因组小,易于体外操作,并能有效表达外源基因,所以用细小病毒为载体具有较大的优势。将pPPV-JT转染PK-15细胞,能够包装出PPV病毒粒子,经理化性质鉴定、特异性试验和PCR鉴定所获得的拯救病毒与原病毒的生物学特征一致,这为进一步构建以PPV为载体的重组病毒奠定了理论与物质基础。用PCR的方法扩增得到PCV-2Cap蛋白的第276~450bp基因片段,包含ORF2的117~131AA线性化抗原表位,将其克隆至pPPV-JT的Nco I限制性酶切位点处,筛选正确的重组子,命名为pPPV-Cap。利用脂质体介导,将pPPV-Cap转染PK-15细胞,获得重组病毒,命名为PPV-Cap。采用RT-PCR与IFA方法对目的基因进行检测,结果表明,目的基因得到了正确的转录与表达。为检测PPV-Cap的免疫原性,将PPV-Cap免疫接种仔猪,采用ELISA方法检测免疫仔猪的抗PPV和PCV-2的体液免疫水平,结果表明PPV-Cap能够诱导仔猪产生抗PPV和PCV-2的免疫反应,为研究PPV-PCV2重组疫苗提供了实验数据。