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研究背景： 细胞是机体最基本的结构和功能单位，在机体代谢过程中相互协调，其中细胞凋亡（apoptosis）对于调节组织发育和内稳态有重要作用。细胞凋亡是细胞死亡的一种形式，一种基本的生命现象，参与机体的生长发育及衰老等多种生理过程，同时也是参与包括肿瘤在内的多种疾病的发病机制的重要因素。细胞凋亡信号转导及分子调控机制一直是生命科学研究领域包括肿瘤在内的许多疾病发生发展过程中的一个非常重要的基本问题。虽然目前凋亡信号转导的主要途径已经明确，溶酶体是介导细胞凋亡的重要结构，且在不同诱导因素引发凋亡时，其凋亡信号转导的途径存在差异，但在多种诱因下溶酶体与线粒体之间凋亡信号转导的具体机制尚未明确。 本实验是在前期研究的基础上进行的，既往我们发现氨基葡萄糖硫酸盐（GlucosamineSulfate，GS）可以诱导K562细胞凋亡，并且这种凋亡是通过溶酶体途径释放CathepsinD(CatD)介导的，而且与Bcl-XL的下调相关结果 1．0.5mmol.L-1、1.0mmol.L-1、5.0mmol.L-1的GS诱导均有细胞抑制作用，5.0mmol.L-1的GS抑制性最强。HE染色对照组K562细胞呈圆形，边界光滑，胞膜无皱缩，而5.0mmol.L-1GS处理72h后，细胞皱缩，胞膜不光滑，出现空泡现象并且细胞有出芽现象。5.0mmol.L-1GS处理72h后Hoechst33342染色显示出凋亡细胞存在。5.0mmol.L-1GS处理72h后DNAladder的电泳图片上出现180-200bp明显条带；在流式细胞仪检测中对照的K562细胞，也有少许凋亡，为肿瘤细胞的自发凋亡，而经过5.0mmol.L-1GS诱导72h后的K562细胞，凋亡明显增多。与未处理的K562细胞相比5.0mmol.L-1GS诱导72h后凋亡率由3.8％变成12.4％,P<0.05，。 2．经过5.0mmol.L-1GS诱导72h后的K562细胞，CatD与Bcl-XL的激光共聚焦信号明显增强，CathepsinD蛋白表达增加，而Bcl-XL蛋白表达减少。K562细胞经用PepstatinA处理，再用5.0mmol.L-1GS诱导72h较GS处理组的CatD的表达减弱，CatD与Bcl-XL的共定位信号较处理前的信号明显增强，CatD蛋白表达减少，而Bcl-XL蛋白表达则没表现出明显差异。 3．脂质体转染干扰RNA后免疫荧光双标的激光共聚焦显示：分别转染CatDsiRNA和Bcl-XLsiRNA组的K562细胞，被转染抑制的信号在共定位的信号中明显减弱。5.0mmol.L-1GS诱导72h分别转染CatDsiRNA和Bcl-XLsiRNA组中，CatD与Bcl-XL的共定位信号CatD相对增强。与转染的K562细胞相比，GS诱导凋亡前后CatD蛋白表达增加而Bcl-XL蛋白表达未见明显差异。 结论： 1．成功构建氨基葡萄糖硫酸盐诱导慢性髓性白血病的凋亡模型。5mmol.L-1的GS诱导的K562细胞凋亡作用明显； 2．5mmol.L-1的GS诱导的凋亡细胞CatD与Bcl-XL的共定位信号明显增强。而CatD蛋白表达增加，Bcl-XL蛋白表达减少。在PepstatinA抑制CatD后，再用5mmol.L-1的GS诱导与单纯的5mmol.L-1的GS诱导的K562细胞，可以看出在PepstatinA抑制后，CatD与Bcl-XL的共定位信号中显现CatD的信号增强。CatD蛋白表达减少，而Bcl-XL蛋白表达则没表现出明显差异。 3．脂质体转染干扰RNACatD与Bcl-XL后两者的共定位信号减弱。干扰CatD后，CatD与Bcl-XL的共定位信号表现为CatD的表达减弱而Bcl-XL相对增强；干扰Bcl-XL后，CatD的表达相对增强。干扰CatD与Bcl-XL前后两者的蛋白表达均受抑制，而在5mmol.L-1的GS诱导后，CatD的表达增强，而Bcl-XL则没有明显变化。