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猪链球菌(Streptococcussuis,SS)是一种重要的人畜共患病病原菌。目前对于该病的治疗主要采用抗生素疗法,但长期大量使用抗生素必然存在抗生素耐药性的风险;另外针对该病,临床上仍缺乏有效预防猪链球菌的疫苗,故寻求能替代的治疗方案以及抗微生物化合物是备受关注的。PTX3是第一个被确认的长正五聚蛋白,具有结合到某些病原微生物的能力,PTX3也可以促进细胞吞噬功能以及随后病原体的清除。另外,PTX3具有充当调理素的治疗效果,可识别微生物成分,引发炎症反应的放大。本试验首先通过构建原核表达载体PET-32a-ptx3,获得原核表达猪源PTX3蛋白,并制备兔抗原核表达PTX3蛋白血清;随后又构建重组真核表达载体pIRES-EGFP-ptx3,并转染至真核表达宿主CHO细胞中,通过G418(750μg/ml)筛选获得能够稳定、大量表达PTX3蛋白的单克隆细胞株,并采用Ni-NTA亲和层析方法纯化细胞培养上清获得纯度较高、性质稳定的真核表达猪源PTX3蛋白;随后成功构建了重组真核表达载体pVAX-ptx3,将纯化的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠(1OOμg/只),在接种后第1,3,5,7,15,20天取外周血及注射部位肌肉,分别用RT-PCR和Western-blot方法进行检测,在第15天左右均可检测到表达产物,表明该重组质粒可在小鼠组织内进行有效表达。通过研究发现表达的猪源PTX3介导一系列抗菌反应,包括提高猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)对猪链球菌2型的吞噬能力以及抑制猪链球菌2型对Hep-2细胞的粘附。在小鼠模型中,用pVAX-ptx3预先接种的小鼠的死亡率降低,并且血、脾、肺、脑中的猪链球菌的载量显著降低;在仔猪模型中,预先接种pVAX-ptx3的仔猪感染猪链球菌2型后,外周血中的细菌载量显著降低,而IL-6和IL-8的血浆水平则显著升高,与此相反,接种组仔猪外周血中的白细胞(WBC)和中性粒细胞(NEU)则相对降低。以上结果表明猪源PTX3以及pVAX-ptx3表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型有一定的抗菌作用,同时构建的pVAX-ptx3表达载体可以在动物体内稳定无害化表达,这可能为猪链球菌病的预防和治疗提供了一个新的视角。