自上世纪60年代出现基于骨髓瘤的单克隆抗体制备技术以来，单克隆抗体在生物医学领域已获得广泛应用，既可以作为研究工具，也可以应用于疾病的诊断与治疗。最常见的单克隆抗体制备技术是基于小鼠-小鼠杂交瘤的小鼠单抗制备技术。近年来，随着生物医学的快速发展，小鼠单抗制备技术逐渐暴露出自身的局限性，如:对小鼠源抗原的反应性较弱、对部分人源抗原的抗体亲和力较低等，因此，开发非小鼠种属来源的新型单抗制备技术成为一个新的研究方向，包括基于大鼠-大鼠杂交瘤的大鼠单抗制备技术、基于家兔杂交瘤技术的兔单抗制备技术等。本研究以大鼠单抗制备技术为研究对象，首先，通过优化本实验室前期建立的大鼠单抗制备方法，解决了影响大鼠单抗制备稳定性的关键影响因素，建立起稳定的大鼠单抗制备技术;然后，应用大鼠单抗技术研制针对HIV病毒衣壳蛋白(P24)的大鼠单抗;最后，探索抗-P24大鼠单抗在HIV诊断试剂开发中的应用潜能。具体研究结果如下:　　 首先，优化大鼠单抗制备技术。通过分析本实验室前期建立的大鼠-大鼠杂交瘤单抗制备技术存在的技术瓶颈问题，确定融合率、融合检测方式、克隆化方式以及腹水诱导成功率等影响大鼠单抗技术推广应用的关键问题作为首选的优化对象。结果显示:(1)胆固醇是影响大鼠-大鼠杂交瘤融合成功率的关键因素，通过在培养基中添加游离胆固醇，融合率可由原来的44.76％左右稳定提高到93.25％左右，建立起稳定的大鼠杂交瘤融合方法;(2)未融合B细胞的凋亡时间是影响融合检测特异性的影响因素，通过两次换液延长融合检测间隔时间，显著降低了融合检测本底，建立了优化的融合检测方法;(3)大鼠骨髓瘤细胞的成集落特性是影响杂交瘤单克隆化的关键影响因素，通过比较多种克隆化方法，最终确定改良的有限稀释法作为最佳的大鼠杂交瘤克隆化方法，提高了获得大鼠单克隆杂交瘤的成功率。(4)大鼠杂交瘤细胞在LOU/CN大鼠腹腔内的腹水诱导成功率与大鼠融合伴侣细胞YB2/0是否适应LOU/CN大鼠腹腔有关，通过将YB2/0细胞导入LOU/CN大鼠腹腔反复驯化，显著提高了YB2/0细胞在LOU/CN大鼠腹腔内的适应性，使大鼠杂交瘤细胞的单抗腹水诱导成功率从原来的49.25％提高到93.25％。　　 其次，利用优化后的大鼠-大鼠杂交瘤技术制备出53个抗HIV病毒衣壳蛋白大鼠单抗(anti-P24rat-mAb)，通过单抗的配对筛选，发现两株大鼠单抗13F8和15A2作为捕获单抗能够与商品化试剂盒中的标记单抗形成最佳配对，不仅灵敏度高且降低了假阳性血清的反应性。上述单抗为进一步改良第四代HIV诊断试剂盒提供了重要的候选原料。　　 总之，本研究发现实验室前期建立的大鼠-大鼠杂交瘤单抗制备技术存在的不稳定影响因素，通过条件优化，建立起一套稳定而高效的大鼠单抗制备技术，并利用该技术制备出P24抗原特异性的大鼠单抗(anti-P24rat-mAb)，评估了anti-P24大鼠单抗应用于诊断试剂研发的潜能，表明大鼠单抗在生物医学领域中具有不错的应用前景。本研究工作为大鼠-大鼠杂交瘤单抗制备技术的推广和应用奠定了坚实基础。