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背景与目的：CyclinY(CCNY)是近年来新被鉴定出的细胞周期蛋白。CCNY有两种异构体CCNYisoform1（CCNY1）和CCNY isoform2(CCNY2)。CCNY1比CCNY2除了多了一段N端的1-54位氨基酸外，其余的氨基酸序列完全相同。现有的研究主要集中在CCNY1上。研究发现，在胶质瘤中CCNY被干扰后可以明显抑制肿瘤的增殖。在肺癌中CCNYmRNA和蛋白水平表达均上调，能促进肿瘤细胞的增殖。但是由于二者的序列高度相似，先前的研究用的CCNY的RNAi的序列和检测CCNY的mRNA和蛋白表达并不能区分开CCNY1和CCNY2。对于二者在肺癌中的表达和功能尚不清楚。为此，本研究中我们设计了区分CCNY1和CCNY2的引物，利用realtime PCR技术检测二者在肺癌细胞系和组织中表达情况，为探讨CCNY1和CCNY2在肺癌中功能提供初步的线索。方法：设计分别针对CCNY1N端,CCNY1和CCNY2的共同部分的检测引物CCNY1-primer和CCNY2-primer,运用realtime PCR检测A549、H1299及H446等9种肺癌细胞和MRC5正常细胞内CCNY1和CCNY2基因的表达；外科手术中获取92例NSCLC组织及配对癌旁组织，检测NSCLC组织及癌旁组织中CCNY1和CCNY2基因的表达水平，同时分析二者的表达与临床的病理参数的关系。结果：本研究在成功建立在转录水平上区分CCNY1和CCNY2的引物基础上，利用real timePCR技术检测了肺癌细胞系及组织中二者的表达水平，结果显示在肺癌细胞系中CCNY1表达下调，而CCNY2却呈上调趋势；在检测的92对样本中，在癌旁组织中CCNY1的表达明显高于癌组织，为癌组织的3.3倍（P<0.05），92对样本中有63例CCNY2在癌旁组织的表达高于癌组织；而CCNY2在肺癌组织的表达为癌旁组织2.03倍（P<0.05），92对样本中有56例CCNY2在癌组织的表达高于癌旁组织。详细的病理参数分析显示CCNY1表达与与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、肿瘤分期无关，但与组织学分化程度有统计学意义（P<0.05）；CCNY2的表达与与病人的性别、年龄、病理类型、分化程度、淋巴结转移、肿瘤分期均无统计学意义，但在组织分化低的组织里CCNY2的表达较高。结论：在建立区分CCNY1和CCNY2的引物基础上首次明确了CCNY的两种异构体在肺癌里的表达：与正常细胞系和组织相比，CCNY1在肺癌细胞系和组织中的表达下调，而CCNY2的表达却呈上调的趋势；CCNY1的表达与组织的分化程度相关，在低分化组织里表达较低且有统计学上差异,而CCNY2在低分化组织里的表达较高。因此，CCNY1和CCNY2的表达可能与肺癌的预后相关；深入研究CCNY两种转录本在肺癌中的表达情况和功能分子机制，有助于为肺癌的预防和治疗提供新的一个思路。背景与目的:cyclinY(CCNY)是最近新发现的一类细胞周期蛋白。研究表明CCNY基因在非小细胞肺癌肿瘤组织和肺癌细胞系中高表达；CCNY基因的表达下调后可显著抑制肺癌细胞增殖。但CCNY在的肺癌中的具体的作用通路尚不清楚。基于此目的，我们利用本实验室已建立的CCNY siRNA的H1299细胞（H1299KD），转染无义siRNA的细胞株H1299作为对照细胞株（H1299NC）的基础上，应用基因表达谱芯片研究CCNY基因下调前后H1299细胞内的基因表达谱的变化，并从基因表达谱中筛选出与肿瘤发生发展的相关基因，应用real time PCR方法对基因表达谱芯片分析结果进行验证，为CCNY在肿瘤中的作用机理研究奠定初步的基础。方法:1.按一步法抽提H1299KD/H1299NC细胞的总RNA,将其纯化后逆转录,以Cy5和Cy3标记cDNA作为探针,在表达谱芯片上进行杂交。经激光扫描仪扫描荧光信号图像,采用GenePix Pro4.0图像分析软件对芯片图像进行数字化处理和分析。2.通过芯片分析获得的表达差异基因，从中选择与肿瘤发生发展的相关基因p21CIP1、DKK1、KIF18A、PCNA和PLK1,用real time PCR检测它们其在CCNY的下调前后H299细胞中的变化倍数,与芯片分析结果进行比较。结果:1.按差异显著性标准筛选出差异表达基因267个,其中呈上调表达的基因175个,呈下调表达的基因92个。CCNY下调后导致了多个肿瘤发生发展相关基因的表达变化,主要涉及细胞增殖、侵袭、转移、细胞周期调控等基因；2.real time PCR对筛选的p21CIP1、KIF18A、DKK1、PCNA和PLK1五个基因检测,实验组的表达量分别为对照组的表达倍数变化,与芯片检测结果具有相同的趋势,且数据非常接。结论:1.通过基因芯片分析CCNY下调后引起H1299细胞内多种基因的表达改变，其中一些涉及肿瘤相关基因和重要信号通路。2.通过基因表达谱筛选出的五个与肿瘤相关基因，进行real time PCR验证，与基因芯片的结果大小趋势符合的很好，为后续的CCNY在肿瘤中的功能机制方面研究奠定了基础。3.CCNY1和CCNY2可能通过不同的途径在肺癌中发挥作用。研究二者在肺癌的作用机理可能为肺癌治疗提供新的策略。