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目的:观察淋巴细胞功能相关抗原1基因缺失(LFA-1-/-)对na(?)ve T细胞体外诱导的辅助性T细胞17(Th17 cell)的生成和体外功能的影响,探讨这两者在IBD发病机制中的意义。方法:1.饲养繁殖LFA-1-/-基因敲除子代小鼠,鼠尾提取DNA,普通PCR方法对其进行基因鉴定。2.采用LFA-1-/-(实验组)及野生型(对照组)C57/B6小鼠,每次实验体外无菌剥离2只小鼠脾脏,分别测量两组小鼠脾脏大小,提取单个核细胞(PBMC)进行计数后经磁珠分选法选出CD4+CD62L+na(?)veT细胞并检测纯度。分选的na(?)ve T细胞用完全培养基重悬后置于CD3,CD28抗体包被的96孔细胞培养板中。体外建立不同的Thl7细胞诱导分化培养体系(空白组;TGF-β组:重组人TGF-β3ng/ml;TGF-β+IL-6组:重组人TGF-β3ng/ml,重组小鼠IL-6 40ng/ml;及TGF-β+IL-6+IL-23组:重组人TGF-β3ng/ml,重组小鼠IL-6 40ng/ml,重组小鼠IL-23 30ng/ml),72～96h后两种流式标记方法检测不同诱导体系及实验组与对照组间Th17细胞的诱导比率及细胞表面分子CD62L、CD69、CD25、及CD45RB的表达变化。荧光定量PCR检测两组分选细胞在同种诱导下核转录因子ROR-γt mRNA及IL-17 mRNA的表达。单个核细胞水平检测细胞因子lL-17A的产生情况。3.用AnnexinV凋亡试剂盒分别在实验的第1、3、7天检测两组分选细胞在TGF-β+IL-6 +IL-23联合诱导下细胞的凋亡情况。4.荧光定量PCR方法检测两组分选的na(?)veT细胞在TGF-β+IL-6 +IL-23联合诱导72小时后细胞因子IL-6、CCR6、CSF2(GM-CSF)mRNA的表达水平。结果:1.成功饲养繁殖,鉴定出子代LFA-1-A基因敲除小鼠。2.无菌操作取得小鼠脾脏,经测量统计后发现,相同周龄的LFA-1-/-小鼠脾脏明显大于野生对照组,但脾脏中CD4+T的数量少于野生对照组。3.磁珠分选出的CD4+CD62L+na(?)veT细胞纯度较高,不同刺激因子诱导na(?)ve T细胞向Th17细胞分化比例不同。低剂量的TGF-β和IL-6可成功诱导出Th17细胞,加入IL-23后能够促进更多Th17细胞的产生。与野生型组小鼠相比,LFA-1-/-组小鼠的na(?)ve T细胞在TGF-β、IL-6和IL-23共同作用培养72～96小时后诱导生成Th17细胞的效应最为明显,转录因子ROR-yt mRNA,IL-17 mRNA和细胞上清中IL-17A的水平升高。4.两组在TGF-β+IL6+IL-23诱导体系中培养96h,细胞表面分子CD25和CD69较na(?)ve T细胞表达上调,CD62L表达下调,CD45RB表达无变化。相比于LFA-1-/-组小鼠,野生型对照组小鼠na(?)veT诱导后表面分子的变化比例更多。5.在TGF-β+IL6+IL-23诱导体系中,LFA-I-/-实验组小鼠诱导出的Th17细胞第1天和第3天的细胞凋亡程度高于野生型小鼠,第7天无统计学差异。6.与野生型组小鼠相比,LFA-1-/-组小鼠的na(?)ve T细胞在TGF-β、IL-6和IL-23共同作用培养72～96小时后除了转录因子ROR-γt mRNA,IL-17 mRNA表达的上调外,IL-6mRNA,CSF2(GM-CSF)mRNA,和 CCR6mRNA 也表达增多。结论:LFA-1-/-基因缺失能影响小鼠na(?)ve T细胞体外向Thl7细胞的转化以及发挥其致病性,但通过何种通路来产生这种影响需要进一步研究。