【摘 要】
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“双杂交”或称“相互作用诱钓”,是一种以在基因水平上重建转录因子功能为基础,利用杂交基因对报告基因的激活来检测蛋白-蛋白间相互作用的一种体内分析方法。它不仅能确定
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“双杂交”或称“相互作用诱钓”,是一种以在基因水平上重建转录因子功能为基础,利用杂交基因对报告基因的激活来检测蛋白-蛋白间相互作用的一种体内分析方法。它不仅能确定已知蛋白质之间是否存在相互作用,还能鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白。哺乳动物双杂交系统是酵母双杂交系统改进后在哺乳动物细胞中的应用。p16INK4a是细胞周期的抑制因子,可以与CDK4/CDK6结合从而抑制其与cyclinD结合,使细胞周期停滞于G1期。p16INK4a的突变会引发多种肿瘤的发生。p16INK4a基因的启动子上存在着Sp1的经典结合位点GC盒,已有研究表明,Sp1能与p16INK4a启动子结合并调控其表达。同时,p16INK4a的表达也受组蛋白乙酰化的调控。在本文中,我们证实组蛋白乙酰转移酶p300与Sp1能够协同增强p16INK4a启动子荧光素酶报告基因的活性,在mRNA及蛋白水平上也能协同上调p16INK4a的表达。哺乳动物双杂交结果显示, Sp1与p300之间的相互作用主要发生在Sp1的N端和p300的Q区之间。
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