研究目的人脑胶质瘤是中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤，目前的治疗方案主要以传统的外科手术切除联合放疗和化疗；由于肿瘤的高度增殖及恶性侵袭，胶质瘤无法彻底治愈。新兴的胶质瘤治疗手段之一的基因治疗，通过研究与胶质瘤生物学行为密切联系的特征性基因及特异性蛋白，运用靶向方法，来达到抑制肿瘤生长甚至消除瘤体的目的，但该治疗方法还远未成熟。有关胶质瘤的研究重点之一，就是寻找合适的能调控其恶性行为的靶向性分子标志物，并进一步揭示其作用机理。本研究通过检测周期素依赖性蛋白激酶亚单位1（cyclin kinase subunit1，Cks1）在人脑胶质瘤及正常脑组织中的表达差异，并结合患者临床病理学特征及随访资料进行统计学数据处理，初步探讨Cks1表达与胶质瘤病理级别、生存预后的关系；进一步通过过表达Cks1慢病毒载体构建，检测Cks1过表达对胶质瘤细胞系的细胞周期的影响，从而探讨Cks1在胶质瘤生物学进程中的功能及作用，或为临床胶质瘤治疗提供新的分子靶向性标志物。研究方法运用免疫组织化学EnVision法及蛋白印迹实验检测Cks1，Skp2，p27在脑胶质瘤组织切片及正常脑组织切片中的蛋白表达水平，对样本患者进行临床病例资料的随访，结合患者病理学特征运用统计学软件进行相关统计学分析。运用PCR等技术构建Cks1过表达慢病毒载体LV5（EF1-GFP/Puro），蛋白印迹实验检测Cks1的表达量并通过流式细胞学技术分析Cks1过表达后胶质瘤细胞系A172细胞周期的影响，初步探讨Cks1在脑胶质瘤发生发展过程中的作用。结果免疫组织化学EnVision法显示Cks1蛋白主要表达在肿瘤细胞细胞核。在正常脑组织中几乎全部有表达，其阳性染色的细胞百分率为58.54±15.66%，在低级别胶质瘤（WHOⅠ~Ⅱ级）和高级别胶质瘤（WHOⅢ~Ⅳ级）中的阳性细胞百分率分别为31.25±27.50%和19.62±18.75%，随着病理级别增高而有降低趋势，三者比较有统计学差异（p<0.05）。Skp2、p27蛋白主要表达在肿瘤细胞细胞核。在正常脑组织中Skp2全部无表达，低级别胶质瘤（WHOⅠ~Ⅱ级）和高级别胶质瘤（WHOⅢ~Ⅳ级）中阳性细胞百分率分别为6.97±5.50%和17.51±17.68%，随病理级别增高而增多，统计学分析表明三者差异有统计学意义（p<0.05）。在正常脑组织中p27表达强阳性，正常脑组织、低级别胶质瘤（WHOⅠ~Ⅱ级）和高级别胶质瘤（WHOⅢ~Ⅳ级）中阳性细胞百分率分别为85.50±7.17%、51.11±19.87%和23.78±17.53%，随病理级别增高而降低，差异有统计学意义（p<0.05）。Western blot显示Cks1在正常脑组织，低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中的蛋白印迹实验条带光密度相对值分别为6.43±1.03、3.61±1.45、1.21±0.87，三者比较差异有统计学意义（p<0.05）。在三个蛋白两两比较中，统计分析提示仅Cks1与p27表达之间呈正相关(r=0.38，p<0.05)，Cks1和Skp2表达之间无相关性（r=0.08，p>0.05），p27和Skp2之间无相关性（r=-0.16，p>0.05）。在评价胶质瘤预后的影响因素时，Cox回归单因素分析提示低肿瘤级别、全切除率、低Skp2和高p27表达对生存预后有利（p<0.05），Cks1表达水平对胶质瘤患者生存时间无统计学意义（p>0.05）。进一步在高级别胶质瘤亚组中对临床有意义指标年龄、切除率、Cks1和Skp2表达水平运用Cox比例风险模型多因素分析，结果提示年龄<55岁、全切除及Cks1高表达的胶质瘤患者有更好的预后（p<0.05）。通过PCR等技术成功构建过表达Cks1慢病毒载体LV5（EF1-GFP/Puro），转染胶质瘤细胞系A172后蛋白印迹实验提示Cks1表达量较母细胞系增高（5.77±0.92vs2.46±0.12，p<0.05）。经流式细胞学技术分析提示过表达Cks1后肿瘤细胞时相变化主要集中在G2/M期，与无目的基因Cks1的干扰组细胞系比较，有统计学意义（38.13±0.72vs15.23±0.33，p<0.05）。结论Cks1在胶质瘤组织中表达于肿瘤细胞核，其表达量随肿瘤级别增高而降低。胶质瘤中，Cks1表达水平与p27表达呈正相关，Cks1高表达对于高级别胶质瘤是延长生存时间的保护因素。Cks1抑制肿瘤发展可能是通过阻滞G2/M期检验点从而影响细胞周期进展，未来仍需要进一步研究Cks1在胶质瘤中的确切功能。