耐FQs大肠杆菌基因突变及检测方法的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hezeliu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
该课题在对动物肠道大肠杆菌的FQs靶位基因与非靶位基因突变研究的基础上,建立了PCR错配扩增突变分析法(MAMA-PCR)和变性高效液相色谱(DHPLC)这2种FQs靶位基因突变的快速检测方法.该论文分为以下四个部分.1.动物、人和环境分离的大肠杆菌FQs靶位突变分析利用PCR扩增后直接测序的方法对动物养殖场分离的72株大肠杆菌进行FQs靶位突变分析.这些菌株来源于食品动物(47株)、人(14株)和环境(11株),环丙沙星MIC范围为0.008~>128μg/ml.首次在大肠杆菌中发现编码拓扑异构酶Ⅳ的parC基因第84位密码子的GAA→GCA突变,引起氨基酸替代为Glu→Ala.2.FQs耐药发展过程中的靶位和非靶位基因突变研究.对FQs靶位基因gyrA和parCQRDR区以及非靶位基因marR进行PCR扩增并测序,以调查在大肠杆菌肠道分离株中,靶位突变与非靶位突变的流行状况,并分析二者与FQs耐药及多重耐药表型的关系.并研究在体外诱导实验中,靶位突变与非靶位突变的动态累积过程及与FQs耐药和多重耐药表型的相关性.3.耐FQs大肠杆菌基因突变MAMA-PCR监测方法的建立及应用错配扩增突变分析PCR(mismatch amplification mutation assay,MAMA-PCR)是一种快速、简便、费用低廉的突变检测方法,其原理是根据野生型序列以突变热点为3端设计引物,并在3端第三个碱基引入错配碱基,使突变型因3端2个碱基错配而不能扩增出条带.该研究旨在建立MAMA-PCR监测耐FQs大肠杆菌gyrA和parC基因突变方法,并应用于调查动物分离株耐FQs大肠杆菌gyrA和parC基因突变流行趋势.4.耐FQs大肠杆菌gyrA和parC基因突变的DHPLC检测方法的建立变性高效液相色谱((denaturing high-performanceliquid chromatography,DHPLC)是一种自动、快速、高通量的基因突变筛查技术.目前广泛应用于与疾病相关的基因突变检测和SNP筛查.2002年首次应用于探测抗生素耐药基因的突变.该研究首次将DHPLC技术应用于探测大肠杆菌gyrA和parCQRDR突变.
其他文献
期刊
本文介绍了SQZ-1型潜孔钻车的结构,工作原理以及管锥式锚杆锚固轨床时钻车工作稳定性的分析。该钻车设计新颖,结构紧凑,集液压、电气、机械、操纵系统在同一钻车上。钻车采用
本研究的7株病毒是从广东、四川、东北三省患病鹅的小肠组织中分离的,初步鉴定为小鹅瘟病毒(Gooseparvovirus,GPV),分别命名为QY/05、SC/05、DB/01/05、FS/05、ZH/05、DB/02/05
摘要:本文主要针对目前体育教学中学生普遍感觉枯燥乏味这一现象提出要培养学生体育兴趣,必须使学生主动参与进来,在自主学习游戏教学中寻求乐趣,在快乐中去学习、锻炼。  关键词:兴趣 自主学习 体育游戏 快乐学习  体育源于生活,生活实际是体育教学不竭的源泉。体育教师在平时体育教学中要转变思想,抛开传统教育模式的束缚,从增进学生健康,让学生快乐学习这一目标出发。在体育课中,教师要以学生的发展为本,尊重学
摘要:如何“快乐学习”是新课改的一项重要目标之一。文章作者在这方面做了些有益的尝试。主要论述了使用“BGM”的目的与理论依据、常用使用场合及尝试中的反思。  关键词:背景音乐 高中英语 教学尝试  一、引言  非重点班的英语教师普遍感到给学生上课是件烦恼的事,有些学生上课总是做与课堂教学无关的事,根本无心听讲。当我在文章中看到有些工厂为了使工人们愉悦,提高生产效率,常在工作中播放音乐。这使我想到若
摘要:有效教学全国蓬勃展开。“有效教学”,不可以简单的理解为教学目标的达成情况,也不可以凭教师完成教学任务的多少来衡量教学是否“有效”。所谓“有效”,主要是指通过教师在一段时间的教学之后,学生所获得的具体的进步或发展。所谓“教学”,是指教师引起、维持或促进学生学习的所有行为。凡是能够有效地促进学生的发展,有效地实现预期的教学结果的教学活动都可以称之为“有效教学”。  关键词:数学 有效 策略  一
国民经济中无废工艺的广泛采用,对开采无法补充的地下资源的采矿工业提出了特殊的要求。关于开采区段有用矿物储量的精确地质资料,是充分利用地下资源的必需条件。在实践中,
利用芥蓝与雅安黄油菜等为材料,人工合成具有地方特征的甘蓝型油菜。试验用赤霉素处理花柱克服杂交不亲和,继以子房和胚培养克服幼胚败育,染色体加倍后获得了甘蓝型的一些新
易门铜矿井下作业,岩石破碎,条件复杂,工作面多变,危险因素多,井下工伤事故占90%以上,其中85%左右属违章事故。为了有效地制止违章作业,减少工伤事故,该矿于1986年开始在七步
豆科牧草的硬实性对生产和科研带来一定的困难,本文用砂纸磨擦法和双氧水处理法对提高几种豆科牧草的硬实性进行了探索,总得来看砂纸磨擦法要比双氧水处理法效果好。