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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又名蓝耳病。该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以妊娠母猪早产,产弱胎、死胎以及木乃伊胎,流产,仔猪和育肥猪严重呼吸道症状的病毒性传染病。我国自1995年首次报道分离得到PRRSV以来,在随后近30年内,PRRS对我国的生猪养殖业一直产生严重影响;2006年在中国南方部分地区暴发的“高热病”,是由高致病性PRRSV(High Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Viruse,HP-PRRSV)引起,直接给我国养猪业造成了巨大的经济损失;2013年NADC30-like毒株在全国迅速蔓延,使得该病的防控形势异常严峻;在2017年我国辽宁首次报道NADC34-like毒株,其流行状况与致病性成为焦点。时至今日,PRRS流行仍较为广泛,其易发生变异、重组,且重组类型复杂多变,给PRRS的防控带来极大挑战。为了解山东省PRRS流行情况,本研究对来自山东省各地不同规模猪场的疑似样品开展病原检测工作。临床调查发现疑似病例多以仔猪呼吸道症状以及母猪繁殖障碍为主,各年龄段发病猪多表现明显的呼吸道症状;剖检多见肺脏水肿,间质增宽以及淋巴结大理石样病变特征。在739份疑似样品中,PRRSV检出阳性率为30.18%(223/739);并且在PRRSV阳性样品中检测到其他病原混合感染的现象,其中PRRSV与PCV2混感率最高,其次是与HPS和SS混感。对1593份血清样本进行PRRS N蛋白抗体检测,抗体阳性率为80.60%(1284/1593),说明我省不同规模猪场PRRSV抗体阳性率较高;利用RT-PCR方法扩增PRRSV阳性样品Nsp2、ORF5和ORF7基因片段,遗传进化树显示大多数流调毒株与现有的参考毒株存在一定的遗传距离,核苷酸同源性低于95%,由此推知当前流行毒株与现有参考毒株存在较大变异。基于前期流调测序结果,本研究筛选12份具有代表性的PRRSV阳性样品,经分离、鉴定获得6株分离株,并对其F5代病毒滴度进行测定,同时进行全基因组测序。结果显示ZJW20210828X分离株的毒价为104.63TCID50/m L,其他5株分离株毒价均大于105.0TCID50/m L。全基因组序列比对显示分离株LL20210319X1、SX20210319X、ZQ20210329X属于1.9亚系,与该亚系参考毒株核苷酸同源性分别为88.0%~93.5%、86.7%~95.0%和87.1%~93.2%,核苷酸同源性相对较低,且LL20210319X1、SX20210319X两株分离株的Nsp2基因序列属于谱系1和5之间,位于一个新的分支;LY20211216X6分离株属于5.1亚系,但ORF5、ORF7基因测序结果分别属于1.5亚系和1.9亚系;407-20210415X分离株属于8.7亚系,但ORF5基因属于谱系8的新分支,ORF7基因属于谱系3;ZJW20210828X分离株属于8.7亚系,但属于单独一个分支。重组分析发现6株分离株存在谱系1、3、5、8两种或三种之间的组合,且其中的谱系1存在NADC30-like和NADC34-like/1-4-4之间的重组,谱系8存在HP-PRRSV-like与CH-1a-like以及Intermediate Subgroup之间的重组。为研究分离株的致病性,我们选取以JXA1为骨架重组谱系3和8的407-20210415X分离株和以NADC30-like为骨架重组谱系1、3、8(包括NADC30-like和NADC34-like)的SX20210319X分离株进行致病性试验,结果显示该两分离毒株组均出现不同程度的体温升高、体重减轻等情况,剖检发现发病猪出现肺脏水肿、间质性肺炎症状,病理切片发现典型的肺脏间质增宽,肺泡壁增厚,综合病毒血症、特异性抗体水平、组织病毒载量等指标分析,两分离毒株组在临床上均有明显的致病性,但因重组类型区别,SX20210319X分离毒株的致病性较弱。该试验为研究我省PRRSV重组毒株的致病性提供了参考依据。综上所述,当前我省PRRSV流行毒株主要为重组毒株,毒株复杂多样性为该病防控增加了困难。本研究丰富了山东省PRRS的流行病学数据,为山东省PRRSV的综合防控提供科学理论参考。