草鱼胶原蛋白的生物学性能及胶原海绵材料的构建

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胶原蛋白是生物体内重要的结构蛋白。近年来,胶原蛋白作为生物材料在医学组织工程中的应用日益广泛。本论文以草鱼鱼皮、鱼鳞、鱼骨为原料分别制备酸溶性胶原蛋白(SKA、SCA、BOA)和酶溶性胶原蛋白(SKP、SCP、BOP),对其结构特征、基本理化性质、体外酶降解性、细胞增殖能力等生物学性能进行了系统研究并与猪皮胶原蛋白(PSP)相比较。在此基础上,进一步开展了鱼皮胶原海绵材料构建、性能表征及其材料交联改性的相关研究,以期为淡水鱼胶原蛋白在生物医学材料中的应用提供理论基础。研究方法和结果如下:低温条件下,分别采用酸提取和酸-酶复合提取法分离得到七种胶原蛋白样品(SKP、SKA、SCA、SCP、BOA、BOP、PSP),其中鱼皮胶原蛋白的提取得率(39.66%,以干基计算)远高于鱼鳞(2.8%)、鱼骨(1.6%)。通过红外光谱、紫外光谱、SDS电泳分析,表明提取所得的七种种胶原样品均为典型的Ⅰ型胶原,并具有较高的纯度。氨基酸组成和肽谱分析表明,草鱼胶原蛋白与猪皮胶原蛋白在氨基酸组成方面存在差异性,但草鱼不同部位来源、不同提取方法制备的胶原蛋白在结构上高度接近。通过测定溶解性、吸水性、持水性、热稳定性、特性粘度,比较了七种胶原蛋白在基本理化性质上的共性和差异性。结果表明,草鱼胶原蛋白(SKA,SKP,SCA,SCP,BOA,BOP)具有较猪皮胶原(PSP)更好的吸水性、持水性;草鱼胶原蛋白在NaCl浓度大于4%或中性pH条件下即出现明显的沉淀现象,溶解度几乎为零;草鱼皮胶原蛋白的特性粘度值与猪皮胶原蛋白很接近,但交叠浓度较小。胶原酶体外降解实验表明,草鱼胶原蛋白与猪皮胶原蛋白样品降解性能相似,最大降解率均达到60%(除BOA外)。通过MTT法检测胶原蛋白对细胞增殖的影响,结果表明草鱼胶原蛋白无细胞毒性且能促进细胞生长。以草鱼鱼皮胶原SKA、SKP和猪皮PSP为原料,在相同条件下制备干燥成型的胶原海绵材料,分别通过SEM显微观察和机械强度测定来表征材料性能,结果显示三种海绵材料均具有多孔、纤维结构,而SKA、SKP表现了较PSP更高的拉伸强度。在此基础上,以SKP为原料制备胶原海绵材料,并分别采用紫外照射、热脱水、戊二醛、EDC-NHS等四种交联改性方法对其进行材料改性处理。通过测定材料机械性能、微观结构、体外降解性能及热稳定性,考察不同交联方法对材料性能的影响。结果表明,交联改性后的材料性能均得到了不同程度的改善。在几种交联方法中,戊二醛交联表现出较好的材料性能改善能力,其交联度达72%,材料机械性能明显增强,变性温度由原始材料的35.57℃升高至67.41℃。
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