绵羊痒螨（Psoroptes ovis）是各种野生动物和家养动物皮肤表面的主要寄生虫,以兔、绵羊和水牛为常见宿主,患病动物表现出皮肤炎症、瘙痒及结痂等临床症状,造成饲料转化率下降、产毛量降低等,甚至造成死亡,给养殖业造成巨大经济损失。尽早诊断所有患病动物是防控痒螨病的前提,但现有结痂镜检的病原学诊断方法对早期和隐形感染病例极易漏检,因此,急需开发痒螨病的早期诊断方法。丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serine protease inhibitor,Serpin）参与了多种寄生虫的抗凝血、繁殖发育和抑制宿主免疫反应等重要生物学过程,且在蠕虫病中具有较高的血清学诊断价值。本研究在课题组前期组学揭示P.ovis中存在Serpin基础上,扩增和原核表达P.ovis的2种Serpin（PsoSP1和PsoSP2）基因,并分析其在P.ovis不同发育阶段的表达量与定位;建立上述2种重组蛋白的间接ELISA,并评价其对兔痒螨病的血清学诊断作用与早期诊断效果。一、绵羊痒螨PsoSP1和PsoSP2基因的原核表达、转录水平与虫体定位分析本研究经扩增成功获得PsoSP1和PsoSP2基因片段长度分别约1572 bp和723bp,经原核表达获得重组融合蛋白rPsoSP1和rPsoSP2分别约75 k Da和46.29 k Da,且2种重组融合蛋白均能被患痒螨病的阳性兔血清识别,表明具有反应原性。实时荧光定量PCR结果显示PsoSP1和PsoSP2基因在雌螨中的表达量极显著高于雄螨、幼螨和若螨（P<0.01）,且成虫、幼虫PsoSP1的表达量高于PsoSP2。免疫荧光组化结果显示PsoSP1定位于雌螨的卵巢,PsoSP2定位于雌螨的口器。本研究结果为阐明PsoSP在P.ovis生理活动中的作用及后续重组蛋白诊断方法的建立打下基础。二、绵羊痒螨rPsoSP1和rPsoSP2用于兔痒螨病的血清学诊断价值评估本研究以上述获得的2种绵羊痒螨rPsoSP1和rPsoSP2作为包被抗原,建立间接ELISA方法并评价其在兔痒螨病中的早期诊断价值。结果显示以rPsoSP1建立的间接ELISA方法（rPsoSP1-iELISA）的最佳包被浓度为46μg/m L,临界值为0.633,敏感性和特异性分别为96.00%和90.91%;以重组蛋白rPsoSP2建立的间接ELISA方法（rPsoSP2-iELISA）的最佳包被浓度为64.5μg/m L,临界值为0.490,敏感性和特异性分别为90.00%和78.18%;rPsoSP1-iELISA的曲线下面积（AUC）（0.983）较rPsoSP2-iELISA的AUC（0.956）更接近1,表明rPsoSP1较rPsoSP2有更高的血清学诊断价值,故选用rPsoSP1-iELISA进行早期诊断评价,发现该诊断方法在新西兰兔感染P.ovis后第2周（无明显结痂症状）的血清阳性率达80%（8/10）,第4周阳性率达（100%）,表明rPsoSP1具有早期诊断兔痒螨病的作用。进一步采用rPsoSP1-iELISA检测有P.ovis流行史的某兔场共158份血清,发现兔血清的阳性率为52.53%（83/158）,高于传统病原学诊断的阳性率（11.39%,18/158）。综上,rPsoSP1-iELISA可用于兔痒螨病的血清学诊断与早期诊断,且该方法较传统病原学诊断方法能检测出更多的亚临床感染病例,为今后兔痒螨病的诊断和控制提供技术支持。