miR-103a-3p在胰腺癌细胞中的表达及意义

来源 :南华大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yangjianwu2008
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目的本研究旨在细胞层面了解miR-103a-3p表达情况,选取侵袭能力从高到低的两株胰腺癌细胞株(PANC-1>BxPC-3)和永生化正常胰腺细胞株(H6C7)为实验对象,验证其在胰腺癌细胞中表达与胰腺癌组织结果是否一致;并进一步筛选出高表达的胰腺癌细胞株,通过构建miR-103a-3p抑制表达的慢病毒载体感染此细胞株,以得到稳定抑制表达miR-103a-3p的胰腺癌细胞株,并通过qRT-PCR检测其表达情况,为下一步的体内实验及靶基因机制研究方面提供实验及理论基础。方法1、采用qRT-PCR检测不同侵袭能力的胰腺癌细胞株(PANC-1、BxPC-3)和永生化正常胰腺细胞(H6C7)中miR-103a-3p表达情况;2、构建miR-103a-3p抑制表达的慢病毒载体,进行慢病毒包装后,获得慢病毒颗粒上清液,感染筛选出来的高表达胰腺癌细胞株;3、利用荧光显微镜观察其转染效率,并通过qRT-PCR检测其表达情况。结果1、qRT-PCR结果显示:miR-103a-3p在正常胰腺细胞株(H6C7)和不同侵袭转移能力的胰腺癌细胞株(PANC-1>BxPC-3)均有表达。miR-103a-3p在PANC-1细胞中相对表达量为4.949±0.130,BxPC-3细胞中相对表达量为1.417±0.120,正常胰腺细胞H6C7中相对表达量为1.010±0.151,两两组间比较,差异显著(P<0.05)。miR-103a-3p在三种细胞中的表达情况为:PANC-1﹥BxPC-3﹥H6C7。2、获得5×108TU/ml滴度的miR-103a-3p-inhibiton慢病毒,感染胰腺癌细胞株,观察其转染效率,获得稳定表达的胰腺癌细胞株。其中miR-103a-3p-inhibitor慢病毒感染细胞者命名为control-PANC-1,阴性对照病毒感染细胞者命名为NC-PANC-1。qRT-PCR检测3株胰腺癌细胞(PANC-1、NC-PANC-1、control-PANC-1)miR-103a-3p的结果显示:miR-103a-3p在PANC-1细胞中相对表达量为(1.002±0.16),NC-PANC-1组相对表达量为(0.956±0.25),Control-PANC-1组相对表达量为(0.317±0.32),PANC-1组与NC-PANC-1组相比,无明显差异(P>0.05)。Control-PANC-1组分别与PANC-1、NC-PANC-1组相比,其表达量显著下降(P<0.05)。结论1、miR-103a-3p在侵袭能力较强的胰腺癌细胞株中表达增高。2、通过慢病毒转染miR-103a-3p-inhibitor后其表达下调,建立了稳定转染PANC-1细胞系。
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