第一部分、电压门控质子通道Hv1在小鼠可卡因成瘾中的作用　　目的：电压门控质子通道（voltage-gated proton channel，Hv1）特异性表达于小胶质细胞上，其主要功能是调节细胞内pH值，维持细胞内稳态并维持烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate oxidase，NOX），主要是NOX2的功能。有研究证明慢性可卡因暴露可导致脑内活性氧物质（reactive oxygen species，ROS）增加和氧化损伤，而阻断Hv1质子通道后可以减少病理情况下由小胶质细胞产生的ROS。因此，本部分主要研究Hv1在可卡因诱导的小鼠成瘾行为中的作用。　　方法：用western blotting方法检测可卡因慢性暴露对奖赏行为相关脑区伏隔核区（nucleus accumbens，NAc）、内侧前额皮层（medial prefrontal cortex，mPFC）以及纹状体（striatum）中Hv1蛋白的表达以及对小胶质细胞激活的影响。运用行为学方法（条件性位置偏好），观察用Hvcn1短发夹核糖核酸（Hvcn1 shRNA）慢病毒载体沉默小鼠NAc区Hv1表达对可卡因诱导的条件性位置偏好的影响。　　结果：Western blotting结果显示，可卡因腹腔注射对小鼠进行条件性位置偏好训练，成瘾小鼠NAc区Hv1表达明显增加，而mPFC和striatum区Hv1表达无明显改变。可卡因腹腔注射7天后，小鼠NAc区Hv1的表达明显增加，且小胶质细胞激活增加，表现为小胶质细胞标记物（ionized calcium binding adapter molecule1，Iba-1）表达上调。Hvcn1 shRNA慢病毒载体有效沉默小鼠NAc区Hv1蛋白。下调NAc区Hv1蛋白后对小鼠条件位置偏好无明显改善，但显著促进可卡因条件性位置偏好的消散。　　结论：慢性可卡因暴露特异性引起小鼠NAc区Hv1表达增加，同时使NAc区小胶质细胞激活增加。Hvcn1 shRNA慢病毒载体有效沉默小鼠NAc区中的Hv1后，虽然对小鼠条件位置偏好无明显改善，但显著促进可卡因条件性位置偏好的消散，提示Hv1参与可卡因成瘾行为过程。　　第二部分、电压门控质子通道Hv1参与小鼠可卡因成瘾的机制　　目的：NOX是产生ROS的主要来源。脑内分布的NOX主要是NOX2，它参与氧化应激和神经炎症，在阿尔兹海默症和帕金森氏症等脑疾病中发挥着重要作用。现有的研究证实，慢性酒精暴露可引起NOX2亚单位gp91phox和ROS水平增加。考虑到慢性可卡因暴露导致Hv1表达上调以及NOX2与Hv1的激活密切相关，本部分主要探讨Hv1参与小鼠成瘾行为的机制是否与NOX2相关。　　方法：用western blotting方法检测慢性可卡因暴露以及运用NOX2抑制剂夹竹桃麻素（apocynin）后，小鼠NAc区中NOX2亚单位gp91phox、p47phox、Hv1、Iba-1的蛋白表达情况。运用丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒检测慢性可卡因暴露以及给予apocynin干预后，小鼠NAc区脂质过氧化水平。采用行为敏化和条件性位置偏好两种行为学方法，观察腹腔注射apocynin对小鼠可卡因成瘾行为的影响。　　结果：可卡因腹腔注射7天可引起小鼠NAc区NOX2亚单位gp91phox和p47phox的蛋白表达增加及该区脂质过氧化水平上升。给予apocynin减少由慢性可卡因暴露引起的小鼠NAc区p47phox表达增加，并降低该区脂质过氧化水平，但对gp91phox的影响不明显。给予apocynin减少由慢性可卡因暴露引起的小鼠NAc区小胶质细胞激活及Hv1蛋白表达增加。位置偏好实验显示，可卡因组小鼠对白色区表现出明显的位置偏好，而在给予可卡因前1h腹腔注射apocynin的小鼠对白色区的位置偏好明显减弱。行为敏化实验发现，腹腔注射apocynin7天组的小鼠的基础自发活动与腹腔注射生理盐水7天的对照组相比无显著性差别，提示apocynin不影响动物的基础运动状态。而相较于连续腹腔注射可卡因7天的小鼠，在给予可卡因前1h腹腔注射apocynin的小鼠自发活动明显减少。　　结论：慢性可卡因暴露可引起小鼠NAc区NOX2激活，脂质过氧化水平增加。NOX抑制剂apocynin降低NAc区脂质过氧化水平，显著抑制由慢性可卡因暴露引起的条件性位置偏好和行为敏化。而apocynin抑制小胶质细胞激活、下调Hv1表达，提示Hv1在小鼠成瘾行为中的作用可能与NOX2密切相关。